OneTaq DNA Polymerase : 汎用 PCR の新スタンダード |
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Taq DNA ポリメラーゼをさらに使いやすくするため、Taq にアーキアタイプの PCR 酵素:Deep Vent DNA Polymerase をブレンドすることで、増幅力と正確性を向上した PCR 酵素である。Taq 自体が正確性が高くなく、GC/TA リッチ領域の増幅と長い領域の増幅が不得意であるが、それを補う性能を有している。 さらに Taq とほぼ同じ酵素特性を有するともに、ランニングコストも低いため、Taq の上位互換酵素として使用できる。 |
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OneTaq の特徴: |
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・Deep Vent DNA Polymerase とのブレンド酵素 |
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・GC リッチ領域を力強く増幅 |
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・正確性は Taq の 2 倍 |
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・最大増幅サイズはテンプレートと領域に依存 (ゲノムの場合は約 6 kb) |
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・主な産物は 3'A 末端 |
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・¥ 11.2~ / rxn (25 ul vol) |
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主なアプリケーション: |
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・コロニー PCR |
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・T/A クローニング用インサートの PCR |
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・クルードサンプルの PCR |
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・ジェノタイピングなどのルーチン PCR |
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OneTaq と同等 PCR 酵素の比較 |
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ヒトゲノム DNA の 55 % 以上の各領域を各社 Taq もしくは Taq ベースの PCR 酵素で増幅した。増幅収量をドットサイズ (丸が大きいほど収量が高い)、特異性を色 (濃い緑色が特異性が高い) で示す。各社酵素の推奨条件で実施、Perkin Elmer LabChip® で PCR 産物を解析した。 |
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OneTaq マスターミックス : テンプレートとプライマーを混ぜるだけ |
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OneTaq にはマスターミックス仕様も提供している。標準用 (~65 % GC 含量) と GC リッチ用 (>65 %) があり、テンプレートとプライマーを入れるだけで簡単にセットアップができる。 |
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標準用マスターミックス (NEB #M0482、左) と GC リッチ用マスターミックス (NEB #M0484、右) を用いて様々な GC 含量のテンプレートを増幅した。テンプレートはヒトあるいは線虫ゲノムを使用。レーン M は 1 kb DNA Ladder (NEB #N3232)。 |
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OneTaq Quick-Load DNA Polymerase:PCR 後にすぐに電気泳動 |
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アガロース電気泳動用の色素が含まれた Quick-Load 仕様もある。PCR 後のローディングダイの添加は不要、そのままゲルにアプライできるため、特にコロニー PCR にお薦めである。色素が PCR に影響をすることはない。
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各社のクイックロード仕様酵素を用いて、ヒトあるいはウイルス DNA を PCR した。棒グラフは増幅収量 (左 Y 軸)、円は純度 (右 Y 軸) を示す。推奨条件にて 30 サイクルで PCR (n=3)、マイクロ流路にて測定。
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OneTaq HotStart DNA Polymerase:アプタマーベースのホットスタート
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OneTaq の各仕様にはホットスタート版もある。45 ℃ 未満でポリメラーゼ活性を抑制する。抗体ではなくアプタマーを使用しているため、活性化ステップも必要なく、PCR サイクルの再設定も必要ない。 |
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特集記事 (英語):sing aptamers to control enzyme activities: Hot Start Taq and beyond |