Gibson Assembly (ギブソン・アッセンブリー・システム）

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Gibson Assembly (ギブソン・アッセンブリー・システム）

Gibson Assembly システム (ギブソン・アッセンブリー・システム)

Gibson の完全上位互換品：NEBuilder Assembly も販売中！サンプルもご利用いただけます。

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■ 複数のDNA断片を１ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです！

■ PCRクローニング、複数DNA断片の一括クローニング、長鎖DNA（数百kb）の合成に最適です！

■ ディレクショナルクローニングも簡単に行えます！

Gibson Assembly はJ. Craig Venter InstituteのGibson博士らによって開発された方法であり、DNA断片のサイズや末端形状に関わらず、複数のDNA断片を繋ぎ合せることができる方法です。

末端に15塩基の相同配列があるDNA断片とGibson Assemblyマスターミックスを混合し、15-60分間インキュベーションするだけの１ステップ反応で複数のDNA断片を繋ぎ合せることができます。面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要な革新的なクローニング方法であり、PCRクローニング、複数DNA断片の一括クローニング、長鎖DNA（数百kb）の合成、ディレクショナルクローニングを簡単に行うことができます。

特長
・ DNA断片とマスターミックスを混合するだけの１ステップ反応
・わずか15-60分間のインキュベーションで終了
・ DNAのサイズや末端形状に依存しないシステム
・面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要		Gibson Assemble システム用のプライマー設計ソフトをご利用下さい。
・ PCRクローニングに最適
・複数のDNA断片の一括クローニングや長鎖DNA（数百kb）の合成も可能
・面倒なディレクショナルクローニングを簡単に実現
・コンピテントセル付属のクローニングキットも提供開始



複数のDNA断片を1ステップでクローニング　－制限酵素やリガーゼは不要
	末端に15塩基の相同配列があるDNA断片とGibson Assemblyマスターミックスを混合し、15-60分間インキュベーションするだけの１ステップ反応で複数のDNA断片を繋ぎ合せることができます。面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要な革新的なクローニング方法です。




Gibson Assembly システムの原理
	Gibson Assembly システムは三つの異なる酵素反応を一つのバッファーで行うことで、複数のDNA断片を一括に繋ぎ合せることができルシステムです。（１）エキソヌクレアーゼが一本鎖の3'オーバーハングを作成し、他方の相補鎖（オーバーラップする部位）とアニーリングできるようにし、（２）ポリメラーゼでそれぞれのアニーリングした断片の間のギャップを埋め、（３）DNA ligaseでニックをつなぎ合わせてDNAをつなぎ合わせます。



高効率でクローニングが可能
	各クローニングキットを用いて、25ngのpUC19ベクターと0.04 pmolの各DNA断片をクローニングした結果、Gibson Assembly Cloning Kitで高い形質転換効率が得られました。推奨するプロトコールに従い、付属のコンピテントセルを使用し、リコンビナントのコロニーはアッセンブル反応に用いた25 ugの線状pUC19ベクター当たりの数として計算しました。



制限酵素切断したDNA断片やPCR産物を95%以上の効率で一括クローニング
	Gibson Assembly Cloning Kitを使用すれば、複数断片を一括してクローニングすることが可能です。NdeIとNotIで切断したpET-21aベクターあるいはPCR増幅したpET21aベクターに、(A)3 kbのPCR断片もしくは、(B)2つの1.5 kbのPCR断片をクローニングしました。アッセンブル効率はトータルコロニー数に対する青コロニー(lacZ遺伝子が挿入されたもの)の割合として計算しました。



10kbのインサートでも94%の高いクローニング効率
	Gibson Assembly Cloning Kitを使用すれば、長いDNA断片も高効率でクローニングすることが可能です。サイズの異なる各断片とベクターを繋ぎ合せて形質転換を行った後、予備増殖(outgrowth)をSOCで10倍希釈し、50 ulをLBプレート（IPTGとX-galを含む）に植菌しました。アッセンブル効率はトータルコロニー数に対する青コロニー(リコンビナント)の割合として計算しました。