1. ホーム
  2. Gibson Assembly (ギブソン・アッセンブリー・システム)

製品情報

Gibson Assembly システム (ギブソン・アッセンブリー・システム)
 
 製品資料はこちら
複数のDNA断片を1ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです!
PCRクローニング、複数DNA断片の一括クローニング、長鎖DNA(数百kb)の合成に最適です!
ディレクショナルクローニングも簡単に行えます!
 

Gibson Assembly はJ. Craig Venter InstituteのGibson博士らによって開発された方法であり、DNA断片のサイズや末端形状に関わらず、複数のDNA断片を繋ぎ合せることができる方法です。


末端に15塩基の相同配列があるDNA断片とGibson Assemblyマスターミックスを混合し、15-60分間インキュベーションするだけの1ステップ反応で複数のDNA断片を繋ぎ合せることができます。面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要な革新的なクローニング方法であり、PCRクローニング、複数DNA断片の一括クローニング、長鎖DNA(数百kb)の合成、ディレクショナルクローニングを簡単に行うことができます。

 

特長

   

・ DNA断片とマスターミックスを混合するだけの1ステップ反応

 

image

・ わずか15-60分間のインキュベーションで終了  
・ DNAのサイズや末端形状に依存しないシステム  
・ 面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要   Gibson Assemble システム用のプライマー設計ソフトをご利用下さい。  
・ PCRクローニングに最適  
・ 複数のDNA断片の一括クローニングや長鎖DNA(数百kb)の合成も可能  
・ 面倒なディレクショナルクローニングを簡単に実現    
・ コンピテントセル付属のクローニングキットも提供開始    

 

 
複数のDNA断片を1ステップでクローニング -制限酵素やリガーゼは不要
  末端に15塩基の相同配列があるDNA断片とGibson Assemblyマスターミックスを混合し、15-60分間インキュベーションするだけの1ステップ反応で複数のDNA断片を繋ぎ合せることができます。面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要な革新的なクローニング方法です。

image

 

 
Gibson Assembly システムの原理
  Gibson Assembly システムは三つの異なる酵素反応を一つのバッファーで行うことで、複数のDNA断片を一括に繋ぎ合せることができルシステムです。(1)エキソヌクレアーゼが一本鎖の3'オーバーハングを作成し、他方の相補鎖(オーバーラップする部位)とアニーリングできるようにし、(2)ポリメラーゼでそれぞれのアニーリングした断片の間のギャップを埋め、(3)DNA ligaseでニックをつなぎ合わせてDNAをつなぎ合わせます。

image

 
 
高効率でクローニングが可能
  各クローニングキットを用いて、25ngのpUC19ベクターと0.04 pmolの各DNA断片をクローニングした結果、Gibson Assembly Cloning Kitで高い形質転換効率が得られました。推奨するプロトコールに従い、付属のコンピテントセルを使用し、リコンビナントのコロニーはアッセンブル反応に用いた25 ugの線状pUC19ベクター当たりの数として計算しました。
 

image

 
 
制限酵素切断したDNA断片やPCR産物を95%以上の効率で一括クローニング

 

Gibson Assembly Cloning Kitを使用すれば、複数断片を一括してクローニングすることが可能です。NdeIとNotIで切断したpET-21aベクターあるいはPCR増幅したpET21aベクターに、(A)3 kbのPCR断片もしくは、(B)2つの1.5 kbのPCR断片をクローニングしました。アッセンブル効率はトータルコロニー数に対する青コロニー(lacZ遺伝子が挿入されたもの)の割合として計算しました。

image

 

 
10kbのインサートでも94%の高いクローニング効率

 

Gibson Assembly Cloning Kitを使用すれば、長いDNA断片も高効率でクローニングすることが可能です。サイズの異なる各断片とベクターを繋ぎ合せて形質転換を行った後、予備増殖(outgrowth)をSOCで10倍希釈し、50 ulをLBプレート(IPTGとX-galを含む)に植菌しました。アッセンブル効率はトータルコロニー数に対する青コロニー(リコンビナント)の割合として計算しました。

image

 

 
製品リスト
 

Gibson Assembly Master Mix

・複数のDNA断片を1ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすためのマスターミックス試薬
 
製品名 製品番号 容量 希望価格
Gibson Assembly Master Mix E2611S 10 reactions ¥18,000
E2611L 50 reactions ¥72,000
*コンピテントセル、クローニング用のベクターは含まれていません。
 

Gibson Assembly Cloning Kit

・Gibson Assembly Master Mix (E2611S)とNEB 5-alpha Competent E. coli (High Efficiency)がセットになったクローニングキット

 
製品名 製品番号 容量 希望価格
Gibson Assembly Cloning Kit E5510S 10 reactions ¥21,600
*クローニング用のベクターは含まれていません。

 

Gibson Assembly システムの製品資料はこちら (PDFダウンロード)


製品に関するご質問は下記テクニカルサポートまでお問い合わせください。

Tel : 0120-963-650 (フリーダイアル)、03-5669-6195

製品に関するお問い合わせ