Gibson Assembly システム (ギブソン・アッセンブリー・システム) |
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Gibson の完全上位互換品:NEBuilder Assembly も販売中! サンプルもご利用いただけます。 |
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製品資料はこちら( ) |
■ 複数のDNA断片を1ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです! |
■ PCRクローニング、複数DNA断片の一括クローニング、長鎖DNA(数百kb)の合成に最適です! |
■ ディレクショナルクローニングも簡単に行えます! |
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Gibson Assembly はJ. Craig Venter InstituteのGibson博士らによって開発された方法であり、DNA断片のサイズや末端形状に関わらず、複数のDNA断片を繋ぎ合せることができる方法です。
末端に15塩基の相同配列があるDNA断片とGibson Assemblyマスターミックスを混合し、15-60分間インキュベーションするだけの1ステップ反応で複数のDNA断片を繋ぎ合せることができます。面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要な革新的なクローニング方法であり、PCRクローニング、複数DNA断片の一括クローニング、長鎖DNA(数百kb)の合成、ディレクショナルクローニングを簡単に行うことができます。
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特長
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・ DNA断片とマスターミックスを混合するだけの1ステップ反応
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・ わずか15-60分間のインキュベーションで終了 |
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・ DNAのサイズや末端形状に依存しないシステム |
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・ 面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要 |
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Gibson Assemble システム用のプライマー設計ソフトをご利用下さい。 |
・ PCRクローニングに最適 |
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・ 複数のDNA断片の一括クローニングや長鎖DNA(数百kb)の合成も可能 |
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・ 面倒なディレクショナルクローニングを簡単に実現 |
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・ コンピテントセル付属のクローニングキットも提供開始 |
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複数のDNA断片を1ステップでクローニング -制限酵素やリガーゼは不要 |
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末端に15塩基の相同配列があるDNA断片とGibson Assemblyマスターミックスを混合し、15-60分間インキュベーションするだけの1ステップ反応で複数のDNA断片を繋ぎ合せることができます。面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要な革新的なクローニング方法です。 |

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Gibson Assembly システムの原理 |
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Gibson Assembly システムは三つの異なる酵素反応を一つのバッファーで行うことで、複数のDNA断片を一括に繋ぎ合せることができルシステムです。(1)エキソヌクレアーゼが一本鎖の3'オーバーハングを作成し、他方の相補鎖(オーバーラップする部位)とアニーリングできるようにし、(2)ポリメラーゼでそれぞれのアニーリングした断片の間のギャップを埋め、(3)DNA ligaseでニックをつなぎ合わせてDNAをつなぎ合わせます。 |

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高効率でクローニングが可能 |
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各クローニングキットを用いて、25ngのpUC19ベクターと0.04 pmolの各DNA断片をクローニングした結果、Gibson Assembly Cloning Kitで高い形質転換効率が得られました。推奨するプロトコールに従い、付属のコンピテントセルを使用し、リコンビナントのコロニーはアッセンブル反応に用いた25 ugの線状pUC19ベクター当たりの数として計算しました。 |

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制限酵素切断したDNA断片やPCR産物を95%以上の効率で一括クローニング |
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Gibson Assembly Cloning Kitを使用すれば、複数断片を一括してクローニングすることが可能です。NdeIとNotIで切断したpET-21aベクターあるいはPCR増幅したpET21aベクターに、(A)3 kbのPCR断片もしくは、(B)2つの1.5 kbのPCR断片をクローニングしました。アッセンブル効率はトータルコロニー数に対する青コロニー(lacZ遺伝子が挿入されたもの)の割合として計算しました。 |

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10kbのインサートでも94%の高いクローニング効率 |
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Gibson Assembly Cloning Kitを使用すれば、長いDNA断片も高効率でクローニングすることが可能です。サイズの異なる各断片とベクターを繋ぎ合せて形質転換を行った後、予備増殖(outgrowth)をSOCで10倍希釈し、50 ulをLBプレート(IPTGとX-galを含む)に植菌しました。アッセンブル効率はトータルコロニー数に対する青コロニー(リコンビナント)の割合として計算しました。 |

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製品リスト |
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Gibson Assembly Master Mix
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・複数のDNA断片を1ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすためのマスターミックス試薬 |
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*コンピテントセル、クローニング用のベクターは含まれていません。 |
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Gibson Assembly Cloning Kit
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・Gibson Assembly Master Mix (E2611S)とNEB 5-alpha Competent E. coli (High Efficiency)がセットになったクローニングキット
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*クローニング用のベクターは含まれていません。 |

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