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新・制限酵素の基礎知識 配布中
NEB の制限酵素と rCutSmart Buffer
 

制限酵素はその種類ごとに至適反応条件が異なり、一般的には塩濃度が異なる 3 種類のバッファーを使い分けます。この場合、制限酵素ごとにバッファーを使い分けたり、ダブルダイジェストの時にバッファーを選択したり、下流の実験に使う前に精製が必要だったり、煩わしいことがたくさんあります。そこで NEB は 20 年以上前から制限酵素バッファーの統一化を目指しており、その中でアミノ酸置換をした遺伝子改変型のハイフィデリティ― (HF) 制限酵素と、rCutSmart バッファーを開発しました。特に rCutSmart バッファーを使用すれば、一般的なクローニングベクターのマルチクローニングサイトに使用されている制限酵素のほぼ 100% が、また NEB で扱っている制限酵素の 210 種類以上が、この rCutSmart バッファーで使用できます。これらの酵素を「rCutSmart 制限酵素」と呼んでいます。

 
image rCutSmart Buffer の特長 ①
210種類以上の NEB 制限酵素が rCutSmart Buffer 中で切断可能
以下に挙げる制限酵素がすべて rCutSmart Buffer を最適バッファーとします。なお、HF 制限酵素もすべてこの中に含まれています。
 
AbaSI AccI AciI AclI AcuI AfeI AflII AgeI-HF
AleI-v2 AluI AlwI AlwNI ApaI ApaLI ApoI-HF AscI
AvaI AvaII AvrII BaeI BamHI-HF BanI BanII BbsI-HF
BbvI BccI BciVI BclI-HF BcoDI BfaI BlpI BmtI-HF
BsaAI BsaBI BsaHI BsaI-HFv2 BsaJI BsaWI BsaXI BseRI
BsiEI BsiHKAI BsiWI-HF BslI BsmAI BsmFI BsmI BsoBI
BspCNI BspDI BspHI BsrBI BsrFI-v2 BsrGI-HF BssHII BssSI-v2
BstBI BstEII-HF BstUI BstZ17I-HF Bsu36I BtgI BtgZI BtsCI
BtsI-v2 Cac8I ClaI CspCI CviAII CviKI-1 DdeI DpnI
DraIII-HF DrdI EaeI EagI-HF EarI EciI Eco53kI EcoNI
EcoRI-HF EcoRV-HF Esp3I FauI Fnu4HI FokI FseI FspEI
HaeII HaeIII HhaI HindIII-HF HinfI HinP1I HpaI HpaII
Hpy166II Hpy188I Hpy188III Hpy99I HpyAV HpyCH4III HpyCH4IV HpyCH4V
I-SceI KasI KpnI-HF LpnPI MboI MboII MfeI MfeI-HF
MluI-HF MlyI MmeI MnlI MscI MseI MslI MspA1I
MspJI MwoI NaeI NarI Nb.BbvCI Nb.BsrDI Nb.BtsI NciI
NdeI NgoMIV NheI-HF NlaIII NlaIV NmeAIII NotI-HF NruI-HF
NspI Nt.AlwI Nt.BbvCI Nt.BsmAI Nt.CviPII PacI PaeR7I PaqCI
PleI PluTI PmeI PmlI PpuMI PshAI PsiI-v2 PspGI
PspXI PstI-HF PvuI-HF PvuII-HF RsaI RsrII SacI-HF SacII
SapI Sau96I SbfI SbfI-HF ScaI-HF ScrFI SexAI SfcI
SfoI SgrAI SmaI SmlI SnaBI SpeI SpeI-HF SphI-HF
SrfI SspI-HF StuI StyD4I StyI-HF TaqI-v2 TfiI TseI
Tsp45I TspMI TspRI Tth111I XbaI XhoI XmaI XmnI
ZraI         HF制限酵素は紫色で表示
 
すべての制限酵素リスト   制限酵素イソシゾマー(同等品)リスト
 
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image rCutSmart Buffer の特長
ダブルダイジェストが容易
以下は多くのベクターのクローニングサイトに使用されている制限酵素です。ほとんどが rCutSmart Buffer で切断できるため、ダブルダイジェストのバッファー選びに苦労をしません。
 
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image rCutSmart Buffer の特長

BSA (またはリコンビナントアルブミン) 添加済みで反応セットアップが簡略化

多くの制限酵素にはバッファーと BSA が別チューブで付属していますが、NEB の制限酵素バッファーにはあらかじめ BSA (またはリコンビナントアルブミン) が添加されています。そのため、反応セットアップを行うことが可能です。
 
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image rCutSmart Buffer の特長
DNA 修飾酵素を使用可能
T4 DNA Ligase や アルカリホスファターゼ (CIP) などの多くの DNA 修飾酵素は、rCutSmart Buffer 中で 100% の活性を示します。つまり、制限酵素反応後は DNA クリーンアップの必要なく、他の DNA 修飾酵素反応を行うことが可能です。以下表に rCutSmart Buffer 中における各 DNA 修飾酵素の活性を示します。
 

表中の注釈:

 +++ : 100 %

 ++ : 50 - 100 %

 + : 0 - 50 %

 

 DNA 修飾酵素  CutSmart Buffer 中における活性  必要な添加剤
 Alkaline Phosphatase (CIP)  +++  
 Antarctic Phosphatase  +++  Requires Zn2+
 Bst DNA Polymerase  +++  
 CpG Methyltransferase (M. SssI)  +++  
 DNA Polymerase I  +++  
 DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment  +++  
 DNA Polymerase Klenow Exo-  +++  
 DNase I (RNase-free)  +++  Requires Ca2+
 E. coli DNA Ligase  +++  Requires NAD
 Exonuclease I  +++  
 Exonuclease III  +++  
 Endonuclease III (Nth), recombinant  +++  
 Exonuclease V (Rec BCD)  +++  Requires ATP
 Exonuclease VII  +++  
 Endonuclease VIII  +++  
 Fpg  +++   
 GpC Methyltransferase (M. CviPI)  +  Requires DTT
 Lambda Exonuclease  ++  
 McrBC  +++  
 Micrococcal Nuclease  +++  Requires Ca2+
 Nuclease BAL-31  +++  
 phi29 DNA Polymerase  +++  Requires DTT
 Quick CIP  +++  
 RecJf  +++  
 rSAP  +++  
 T3 DNA Ligase  +++  Requires ATP + PEG
 T4 DNA Ligase  +++  Requires ATP
 Hi-T4 DNA Ligase  +++  Requires ATP
 Salt-T4 DNA Ligase  +  Requires ATP
 T4 DNA Polymerase  +++  
 T4 Phage β-glucosyltransferase (T4-BGT)  +++  
 T4 Polynucleotide Kinase  +++  Requires ATP + DTT
 T4 PNK (3 ' phosphatase minus)  +++  Requires ATP + DTT
 T5 Exonuclease  +++  
 T7 DNA Ligase  +++  Requires ATP + PEG
 T7 DNA Polymerase (unmodified)  +++  
 T7 Exonuclease  +++  
 Thermolabile ExoI  +++  
 USER Enzyme, recombinant  +++  
 
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CutSmart Buffer から rCutSmart Buffer へ
 
BSA は反応中の酵素・タンパク質の安定化や、チューブ壁面やピペットチップ表面への非特異的吸着を防ぐことができるため、多くの酵素溶液とバッファーに含まれています。NEB の制限酵素バッファー: NEBuffer および CutSmart Buffer にも BSA が含まれていますが、2021 年 4 月より、BSA を リコンビナントアルブミンに変更することといたしました。また、この変更に伴い、バッファー名称も変更し、CutSmart Buffer は 新たに rCutSmart Buffer と名称を変更します。実際の製品変更は順次行っております。詳細は「NEBuffer の一部変更のご案内」 をご覧ください。
 
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rCutSmart Buffer 制限酵素 価格リスト
 
すべての制限酵素リスト   制限酵素イソシゾマー(同等品)リスト
 製品名 製品番号 容量
 AatII  R0117S 500 U 
 R0117L 2,500 U 
 AbaSI  R0665S 1,000 U 
 AccI  R0161S 1,000 U 
 R0161L 5,000 U 
 AciI  R0551S 200 U 
 R0551L 1,000 U 
 AclI  R0598S 300 U 
 R0598L  1,500 U 
 AcuI  R0641S 300 U 
 R0641L 1,500 U 
 AfeI  R0652S 200 U 
 R0652L 1,000 U 
 AflII  R0520S 2,000 U 
 R0520L 10,000 U 
 AgeI-HF  R3552S 300 U 
 R3552L 1,500 U 
 AhdI  R0584S 1,000 U 
 R0584L 5,000 U 
 AleI-v2  R0685S 500 U 
 R0685L 2,500 U 
 AluI  R0137S 1,000 U 
 R0137L 5,000 U 
 AlwI  R0513S 500 U 
 R0513L 2,500 U 
 AlwNI  R0514S 500 U 
 R0514L 2,500 U 
 ApaI  R0114S 5,000 U 
 R0114L 25,000 U 
 ApaLI  R0507S 2,500 U 
 R0507L 12,500 U 
 R0507M* 12,500 U 
 ApoI-HF  R3566S 1,000 U 
 R3566L 5,000 U 
 AscI  R0558S 500 U 
 R0558L 2,500 U 
 AsiSI  R0630S 500 U 
 R0630L 2,500 U 
 AvaI  R0152S 2,000 U 
 R0152L 10,000 U 
 R0152T* 2,000 U 
 R0152M* 10,000 U 
 AvaII  R0153S 2,000 U 
 R0153L 10,000 U 
 R0153M* 10,000 U 
 AvrII  R0174S 100 U 
 R0174L 500 U 
 BaeI  R0613S 250 U
 BamHI-HF  R3136S 10,000 U 
 R3136L 50,000 U 
 R3136T* 10,000 U 
 R3136M* 50,000 U 
 BanI  R0118S 5,000 U 
 BanII  R0119S 2,000 U 
 BbsI-HF  R3539S 300 U 
 R3539L 1,500 U 
 BbvCI  R0601S 100 U 
 R0601L 500 U 
 BbvI  R0173S 300 U 
 BccI  R0704S 1,000 U 
 R0704L 5,000 U 
 BciVI  R0596S 200 U 
 R0596L 1,000 U 
 BclI-HF  R3160S 3,000 U 
 R3160L 15,000 U 
 BcoDI  R0542S 1,000 U 
 BfaI  R0568S 500 U 
 R0568L 2,500 U 
 BlpI  R0585S 500 U 
 R0585L 2,500 U 
 BmtI-HF  R3658S 300 U 
 R3658L 1,500 U 
 BpuEI  R0633S 500 U 
 BsaAI  R0531S 500 U 
 BsaBI  R0537S 2,000 U 
 BsaHI  R0556S 2,000 U 
 BsaI-HFv2  R3733S 1,000 U 
 R3733L 5,000 U 
 BsaJI  R0536S 1,000 U 
 BsaWI  R0567S 250 U 
 BsaXI  R0609S 100 U 
 R0609L 500 U 
 BseRI  R0581S 200 U 
 R0581L 1,000 U 
 BsgI  R0559S 50 U 
 R0559L 250 U 
 BsiEI  R0554S 1,000 U 
 BsiHKAI  R0570S 1,000 U 
 BsiWI-HF  R3553S 300 U 
 R3553L 1,500 U 
 BslI  R0555S 1,000 U 
 R0555L 5,000 U 
 BsmAI  R0529S 1,000 U 
 R0529L 5,000 U 
 BsmFI  R0572S 100 U 
 R0572L 500 U 
 BsmI  R0134S 500 U 
 R0134L 2,500 U 
 BsoBI  R0586S 10,000 U 
 Bsp1286I  R0120S 500 U 
 BspCNI  R0624S 100 U 
 BspDI  R0557S 2,000 U 
 BspHI  R0517S 500 U 
 R0517L 2,500 U 
 BsrBI  R0102S 1,000 U 
 R0102L 5,000 U 
 BsrFI-v2  R0682S 1,000 U 
 BsrGI-HF  R3575S 1,000 U 
 R3575L 5,000 U 
 BssHII  R0199S 500 U 
 R0199L 2,500 U 
 R0199M* 2,500 U 
 BssSI-v2  R0680S 200 U 
 R0680L 1,000 U 
 BstAPI  R0654S 200 U 
 R0654L 1,000 U 
 BstBI  R0519S 2,500 U 
 R0519L 12,500 U 
 BstEII-HF  R3162S 2,000 U 
 R3162L 10,000 U 
 R3162M* 10,000 U 
 BstUI  R0518S 1,000 U 
 R0518L 5,000 U 
 BstZ17I-HF  R3594S 1,000 U 
 R3594L 5,000 U 
 Bsu36I  R0524S 1,000 U 
 R0524L 5,000 U 
 BtgI  R0608S 1,000 U 
 BtgZI  R0703S 100 U 
 R0703L 500 U 
 BtsCI  R0647S 2,000 U 
 BtsIMutI  R0664S 100 U 
 BtsI-v2  R0667S 500 U 
 R0667L 2,500 U 
 Cac8I  R0579L 500 U 
 ClaI  R0197S 1,000 U 
 R0197L 5,000 U 
 CspCI  R0645S 500 U 
 CviAII  R0640S 200 U 
 R0640L 1,000 U 
 CviKI-1  R0710S 250 U
 DdeI  R0175S 1,000 U 
 R0175L 5,000 U 
 DpnI  R0176S 1,000 U 
 R0176L 5,000 U 
 DraI  R0129S 2,000 U 
 R0129L 10,000 U 
 DraIII-HF  R3510S 1,000 U 
 R3510L 5,000 U 
 DrdI  R0530S 300 U 
 R0530L 1,500 U 
 EaeI  R0508S 200 U 
 R0508L 1,000 U 
  EagI-HF  R3505S 500 U 
 R3505L 2,500 U 
 R3505M* 2,500 U 
 EarI  R0528S 500 U 
 R0528L 2,500 U 
 EciI  R0590S 100 U 
 R0590L 500 U 
 Eco53kI  R0116S 1,000 U 
 EcoNI  R0521S 1,000 U 
 R0521L 5,000 U 
 EcoO109I  R0503S 2,000 U 
 EcoRI-HF  R3101S 10,000 U 
 R3101L 50,000 U 
 R3101T* 10,000 U 
 R3101M* 50,000 U 
 EcoRV-HF  R3195S 4,000 U 
 R3195L 20,000 U 
 R3195T* 4,000 U 
 R3195M* 20,000 U 
 Esp3I  R0734S 300 U 
 R0734L 1,500 U 
 FauI  R0651S 200 U 
 Fnu4HI  R0178S 200 U 
 R0178L 1,000 U 
 FokI  R0109S 1,000 U 
 R0109L 5,000 U 
 FseI  R0588S 100 U 
 R0588L 500 U 
 FspEI  R0662S 200 U 
 FspI  R0135S 500 U 
 R0135L 2,500 U 
 HaeII  R0107S 2,000 U 
 R0107L 10,000 U 
 HaeIII  R0108S 3,000 U 
 R0108L 15,000 U 
 R0108T* 3,000 U 
 R0108M* 15,000 U 
 HhaI  R0139S 2,000 U 
 R0139L 10,000 U 
 HindIII-HF  R3104S 10,000 U 
 R3104L 50,000 U 
 R3104T* 10,000 U 
 R3104M* 50,000 U 
 HinfI  R0155S 5,000 U 
 R0155L 25,000 U 
 R0155T* 5,000 U 
 R0155M* 25,000 U 
 HinP1I  R0124S 2,000 U 
 HpaI  R0105S 500 U 
 R0105L 2,500 U 
 HpaII  R0171S 2,000 U 
 R0171L 10,000 U 
 R0171M* 10,000 U 
 HphI  R0158S 1,000 U 
 R0158L 5,000 U 
 Hpy166II  R0616S 1,000 U 
 Hpy188I  R0617S 1,000 U 
 R0617L 5,000 U 
 Hpy188III  R0622S 500 U 
 R0622L 2,500 U 
 
 製品名 製品番号 容量
 Hpy99I  R0615S 100 U 
 R0615L 500 U 
 HpyAV  R0621S 100 U 
 R0621L 500 U 
 HpyCH4III  R0618S 250 U
 R0618L 1,250 U
 HpyCH4IV  R0619S 500 U 
 R0619L 2,500 U 
 HpyCH4V  R0620S 100 U 
 R0620L 500 U 
 I-CeuI  R0699S 500 U 
 R0699L 2,500 U 
 I-SceI  R0694S 500 U 
 R0694L 2,500 U 
 KasI  R0544S 250 U
 R0544L 1,250 U
 KpnI-HF  R3142S 4,000 U 
 R3142L 20,000 U 
 R3142M* 20,000 U 
 LpnPI  R0663S 200 U 
 MboI  R0147L 2,500 U 
 R0147M* 2,500 U 
 MboII  R0148S 300 U 
 R0148L 1,500 U 
 MfeI  R0589S 500 U 
 R0589L 2,500 U 
 MfeI-HF  R3589S 500 U 
 R3589L 2,500 U 
 MluCI  R0538S 1,000 U 
 R0538L 5,000 U 
 MluI-HF  R3198S 1,000 U 
 R3198L 5,000 U 
 MlyI  R0610S 1,000 U 
 R0610L 5,000 U 
 MmeI  R0637S 100 U 
 R0637L 500 U 
 MnlI  R0163S 500 U 
 R0163L 2,500 U 
 MscI  R0534S 250 U
 R0534L 1,250 U
 R0534M* 1,250 U
 MseI  R0525S 500 U 
 R0525L 2,500 U 
 R0525M* 2,500 U 
 MslI  R0571S 500 U 
 R0571L 2,500 U 
 MspA1I  R0577S 500 U 
 R0577L 2,500 U 
 MspI  R0106S 5,000 U 
 R0106L 25,000 U 
 R0106T* 5,000 U 
 R0106M* 25,000 U 
 MspJI  R0661S 200 U 
 R0661L 1,000 U 
 MwoI  R0573S 500 U 
 R0573L 2,500 U 
 NaeI  R0190S 500 U 
 R0190L 2,500 U 
 NarI  R0191S 500 U 
 R0191L 2,500 U 
 Nb.BbvCI  R0631S 1,000 U 
 R0631L 5,000 U 
 Nb.BsrDI  R0648S 1,000 U 
 R0648L 5,000 U 
 Nb.BtsI  R0707S 1,000 U 
 NciI  R0196S 2,000 U 
 R0196L 10,000 U 
 NcoI-HF  R3193S 1,000 U 
 R3193L 5,000 U 
 R3193M* 5,000 U 
 NdeI  R0111S 4,000 U 
 R0111L 20,000 U 
 NgoM*IV  R0564S 1,000 U 
 R0564L 5,000 U 
 NheI-HF  R3131S 1,000 U 
 R3131L 5,000 U 
 R3131M* 5,000 U 
 NlaIII  R0125S 500 U 
 R0125L 2,500 U 
 NlaIV  R0126S 200 U 
 NmeAIII  R0711S 250 U
 NotI-HF  R3189S 500 U 
 R3189L 2,500 U 
 R3189M* 2,500 U 
 NruI-HF  R3192S 1,000 U 
 R3192L 5,000 U 
 NsiI-HF  R3127S 1,000 U 
 R3127L 5,000 U 
 NspI  R0602S 250 U
 R0602L 1,250 U
 Nt.AlwI  R0627S 500 U 
 Nt.BbvCI  R0632S 1,000 U 
 R0632L 5,000 U 
 Nt.BsmAI  R0121S 500 U 
 Nt.CviPII  R0626S 40 U
 PacI  R0547S 250 U
 R0547L 1,250 U
 PaeR7I  R0177S 2,000 U 
 PaqCI  R0745S 200 U 
 R0745L 1,000 U 
 PflFI  R0595S 2,000 U 
 PleI  R0515S 1,000 U 
 PluTI  R0713S 500 U 
 PmeI  R0560S 500 U 
 R0560L 2,500 U 
 PmlI  R0532S 2,000 U 
 R0532L 10,000 U 
 PpuMI  R0506S 500 U 
 R0506L 2,500 U 
 PshAI  R0593S 1,000 U 
 R0593L 5,000 U 
 PsiI-v2  R0744S 400 U 
 R0744L 2,000 U 
 PspGI  R0611S 1,000 U 
 PspOMI  R0653S 1,500 U 
 R0653L 7,500 U 
 PspXI  R0656S 200 U 
 R0656L 1,000 U 
 PstI-HF  R3140S 10,000 U 
 R3140L 50,000 U 
 R3140T* 10,000 U 
 R3140M* 50,000 U 
 PvuI-HF  R3150S 500 U 
 R3150L 2,500 U 
 PvuII-HF  R3151S 5,000 U 
 R3151L 25,000 U 
 R3151M* 25,000 U 
 RsaI  R0167S 1,000 U 
 R0167L 5,000 U 
 RsrII  R0501S 500 U 
 R0501L 2,500 U 
 SacI-HF  R3156S 2,000 U 
 R3156L 10,000 U 
 R3156M* 10,000 U 
 SacII  R0157S 2,000 U 
 R0157L 10,000 U 
 SalI-HF  R3138S 2,000 U 
 R3138L 10,000 U 
 R3138T* 2,000 U 
 R3138M* 10,000 U 
 SapI  R0569S 250 U
 R0569L 1,250 U
 SbfI  R0642S 500 U 
 R0642L 2,500 U 
 SbfI-HF  R3642S 500 U 
 R3642L 2,500 U 
 ScaI-HF  R3122S 1,000 U 
 R3122L 5,000 U 
 R3122M* 5,000 U 
 ScrFI  R0110S 1,000 U 
 SexAI  R0605S 200 U 
 R0605L 1,000 U 
 SfcI  R0561S 200 U 
 R0561L 1,000 U 
 SfiI  R0123S 3,000 U 
 R0123L 15,000 U 
 SfoI  R0606S 500 U 
 R0606L 2,500 U 
 SgrAI  R0603S 1,000 U 
 R0603L 5,000 U 
 SmaI  R0141S 2,000 U 
 R0141L 10,000 U 
 SmlI  R0597S 500 U 
 R0597L 2,500 U 
 SnaBI  R0130S 500 U 
 R0130L 2,500 U 
 R0130M* 2,500 U 
 SpeI  R0133S 500 U 
 R0133L 2,500 U 
 SpeI-HF  R3133S 500 U 
 R3133L 2,500 U 
 R3133M* 2,500 U 
 SphI-HF  R3182S 500 U 
 R3182L 2,500 U 
 R3182M* 2,500 U 
 SrfI  R0629S 500 U 
 R0629L 2,500 U 
 SspI-HF  R3132S 1,000 U 
 R3132L 5,000 U 
 R3132M* 5,000 U 
 StuI  R0187S 1,000 U 
 R0187L 5,000 U 
 R0187M* 5,000 U 
 StyD4I  R0638S 200 U 
 StyI-HF  R3500S 3,000 U 
 R3500L 15,000 U 
 TaqI-v2  R0149S 4,000 U 
 R0149L 20,000 U 
 R0149T* 4,000 U 
 R0149M* 20,000 U 
 TfiI  R0546S 500 U 
 TseI  R0591L 375 U
 Tsp45I  R0583S 200 U 
 R0583L 1,000 U 
 TspMI  R0709S 200 U 
 TspRI  R0582S 1,000 U 
 Tth111I  R0185S 400 U 
 XbaI  R0145S 3,000 U 
 R0145L 15,000 U 
 R0145T* 3,000 U 
 R0145M* 15,000 U 
 XhoI  R0146S 5,000 U 
 R0146L 25,000 U 
 R0146M* 25,000 U 
 XmaI  R0180S 500 U 
 R0180L 2,500 U 
 R0180M* 2,500 U 
 XmnI  R0194S 1,000 U 
 R0194L 5,000 U 
 ZraI    R0659S 200 U 
 R0659L   1,000 U 

*高濃度酵素 

 
 

 

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