KpnI-HF (R3142) - New England Biolabs Japan

KpnI-HF

KpnI-HFカタログ番号:R3142

カタログ番号	サイズ	濃度	価格	保存温度
R3142S	4,000 units	20,000 units/ml	¥9,400	-20C
R3142L	20,000 units	20,000 units/ml	¥38,400	-20C
R3142M	20,000 units	100,000 units/ml	¥38,400	-20C

認識部位:

| Isoschizomers

説明:
ハイフィデリティー(HF)制限酵素は 1) rCutSmartバッファーで切断可能、2) 5－15分間で切断可能、3) スター活性を極限まで低減、の特長を兼ね備えた次世代型制限酵素である。200種類の制限酵素がrCutSmart Bufferで切断可能である。

由来：

Klebsiella pneumoniae OK8 (ATCC 49790)由来のKpnIを遺伝子改変したものをクローニングした遺伝子を有する大腸菌

付属試薬：

・rCutSmart Buffer (10X)

・Gel Loading Dye, Purple (6X)

ユニット定義：

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのpXba DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

反応条件：

1X rCutSmart Buffer

37℃でインキュベーション。

1X rCutSmart Buffer 組成：

・50 mM Potassium Acetate
・20 mM Tris-acetate
・10 mM Magnesium Acetate
・100 μg/ml Recombinant Albumin
pH 7.9 @ 25°C

各バッファー中における活性：

希釈バッファー：

Diluent A

保存温度：

－20℃

保存液組成：

・10 mM Tris-HCl
・50 mM KCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

熱による不活性化：

不可

メチル化感受性：

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

・	青/白スクリーニングアッセイ
	10倍過剰の制限酵素でDNAベクターを線状化し、再ライゲーションした後、LacZ beta遺伝子を発現する大腸菌株に形質転換し、白コロニーの出現頻度が1%未満であることを確認。

・	エンドヌクレアーゼ活性（ニッキング）
	スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。

・	エキソヌクレアーゼ活性（同位体標識塩基のリリース）
	同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。

・	ライゲーションおよびリカッティング
	制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。

・	非特異的DNase活性（16時間）
	DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。