Gibson Assembly Master Mix (E2611) - New England Biolabs Japan

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Gibson Assembly Master Mix

Gibson Assembly Master Mix

Gibson Assembly Master Mixカタログ番号:E2611

カタログ番号	サイズ	濃度	価格	保存温度
E2611S	10 reactions		¥24,000	-20C
E2611L	50 reactions		¥95,000	-20C

製品カテゴリ>グループ

ＤＮＡ修飾酵素&クローニング>クローニングキット

備考

備考：価格改定 (2023年4月1日)

特徴

DNA断片を1ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです！

・わずか15-60分間のインキュベーションで終了

・ PCRクローニングに最適

・複数DNA断片 (6本以上)の一括クローニング

・長鎖DNA (数百kb)の合成も可能

・面倒なディレクショナルクローニングも簡単

DNAとマスターミックスを混合するだけの1チューブ反応です！

図を拡大して表示	実験手順
	1.	15-20bpの相同配列を含むDNA断片、ベクター、マスターミックスを混合
	2.	50℃で15-60分間インキュベート
	3.	大腸菌に形質転換




	プライマー設計ツールを利用可能

Gibson Assembly システム
	Gibson Assembly はJ. Craig Venter InstituteのGibson博士らによって開発された方法であり、DNA断片のサイズや末端形状に関わらず、複数のDNA断片を繋ぎ合せることができる方法です。末端に15塩基の相同配列があるDNA断片とGibson Assemblyマスターミックスを混合し、15-60分間インキュベーションするだけの１ステップ反応で複数のDNA断片を繋ぎ合せることができます。面倒な制限酵素やりガーゼによる処理は一切不必要な革新的なクローニング方法であり、PCRクローニング、複数DNA断片の一括クローニング、長鎖DNA（数百kb）の合成、ディレクショナルクローニングを簡単に行うことができます。

図1：Gibson Assembly システムの原理
	Gibson Assembly システムは三つの異なる酵素反応を一つのバッファーで行うことで、複数のDNA断片を一括に繋ぎ合せることができるシステムです。（１）エキソヌクレアーゼが一本鎖の3'オーバーハングを作成し、他方の相補鎖（オーバーラップする部位）とアニーリングできるようにし、（２）ポリメラーゼでそれぞれのアニーリングした断片の間のギャップを埋め、（３）DNA ligaseでニックをつなぎ合わせてDNAをつなぎ合わせます。



図2：高効率でクローニングが可能
	Gibson Assembly システムは競合他社製品よりも高い効率でクローニングが可能である。1 kb、3 kb、5 kbのDNA断片のクローニング効率を比較したところ、Gibson Assembly システムは他社製品よりもクローニング効率が高いことが示されました。



図3：長いDNAも高効率でクローニングが可能
	Gibson Assembly システムは長いDNAも高効率でクローニングすることが可能です。1～12 kbの各DNA断片のクローニング効率を検証したところ、10 kb以上のDNAも高効率でクローニングできることが示されました。

プロトコール

プロトコール＆マニュアル（英語）

相同配列のデザイン

ギブソン・アッセンブリ―でDNA断片を繋ぎ合わすためには、15bp以上の相同配列が必要です。

他社同等品とは相同配列の設計が異なる場合がありますので、以下説明をご参照の上、相同配列を設計してください。

また相同配列の設計にはNEBuilder（オンライン・プライマー設計ツール）が便利ですので是非ともご利用ください。

		オンライン・プライマー設計ツールを利用可能

図4：制限酵素で切断したベクターとPCRで増幅したインサートのつなぎ合わせ

制限酵素で切断した線状ベクターは、5'突出末端、3'突出末端、平滑末端のいずれかの末端形状になります。インサートDNAをPCRで増幅する場合、ベクターの末端形状によらず、ベクターの3'末端の最初の塩基から相同配列を設計します。例えば5'突出末端（図の1段目）の場合、陥没部分の3'末端に合わせて相同配列を設計します（Overlap Regions、最上段のオレンジ色の部分と最下段の青色の部分）。またインサートDNAのPCRには正確性と増幅性の高いQ5 DNA ポリメラーゼを推奨します。