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BstEII-HF

BstEII-HFカタログ番号:R3162

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R3162S 2,000 units 20,000 units/ml ¥9,700 -20C
R3162L 10,000 units 20,000 units/ml ¥38,800 -20C
R3162M 10,000 units 100,000 units/ml ¥38,800 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>ハイフィデリティー(HF)制限酵素
  • 制限酵素>制限酵素

特徴

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認識部位:

Recognition

 | Isoschizomers

 

説明:
ハイフィデリティー(HF)制限酵素は 1) CutSmartバッファーで切断可能、2) 5-15分間で切断可能、3) スター活性を極限まで低減、の特長を兼ね備えた次世代型制限酵素である。200種類の制限酵素がCutSmart Bufferで切断可能である。

ハイフィデリティー(High-Fidelity, HF)制限酵素の詳細はこちら

 

由来:
Bacillus stearothermophilus ET (N. Welker) からクローニングされたBstEII-HF遺伝子を有するE. coli株。

 

付属試薬:

・CutSmart Buffer (10X)

・Gel Loading Dye, Purple (6X)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのλ DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X CutSmart Buffer

37℃でインキュベーション。

 

1X CutSmart Buffer 組成:

・50 mM Potassium Acetate
・20 mM Tris-acetate
・10 mM Magnesium Acetate
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 10 % 
NEBuffer 2.1  : 10 % 
NEBuffer 3.1  : 10 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

 

希釈バッファー:

Diluent A

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・50 mM KCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

不可

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : 感受性なし

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

エンドヌクレアーゼ活性(ニッキング)
  スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。
   
エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

1. BstEII-HF™はBstEII (NEB #R0162)と同様のDNA切断活性を有するが、スター活性が低減されている。

2. 知られている3,000以上の制限酵素の中でもBstEIIは4塩基以上の突出末端を生成する数少ない酵素の1つである。 

Legal

Patents:
New England Biolabs, Inc.: US20110151450 and WO2011097590