NEB Stable Competent E. coli (High Efficiency)
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格 |
保存温度 |
|---|---|---|---|---|
| C3040I | 0.2 ml x 6 | ¥37,800 | -80C | |
| C3040H | 0.05 ml x 20 | ¥49,000 | -80C |
製品カテゴリ>グループ
- コンピテントセル>クローニング用コンピテントセル
備考
- 備考：価格改定 (2022年10月1日)
特徴
NEB Stable Competent E.coliはリピート配列/逆位リピートを含む不安定な遺伝子のクローニングに最適な大腸菌コンピテントセルである。リピート配列を有するプラスミドの増幅に効果的である。
特長
・リピート配列を含む不安定な遺伝子のクローニングに最適
・レトロウイルス/レンチウイルス・ベクターのクローニングに最適
・形質転換効率は1-3 x 109 cfu/µg pUC19 DNA
・DNAの組換えを抑制 (recA1)
・DNAの分解を抑制(endA1)
・ブルー/ホワイト・スクリーニングが可能
・5分間での形質転換も可能 (形質転換効率は1 x 107 cfu/µg pUC19 DNA)
NEB Stable株：リピート配列を含むインサートを高い成功率でクローニング可能
図の説明：
NEB Stableを使用すれば、従来は困難であったリピート配列を含むインサートを高い成功率でクローニングすることが可能となる。
32bp x 5回リピート配列を含むインサートのクローニング効率を検証したところ、(A)NEB Stable株では97%の割合でリピート配列が維持されているのに対して、(B)Stbl3株では67%しか維持されていないことが示され、NEB Stable株ではリピート配列の組換えによるインサートの欠落頻度が大幅に低減されていることが示された。
クローニングの検証方法：
Gibson Assemblyを使用して32 x 5回リピート配列を含むインサートをpUC19ベクターに挿入、NEB Stable株とStbl3株に形質転換して100 µg/mlのアンピシリンを含むLBプレートで30℃でオーバーナイトで培養してコロニーを形成させた。クローニングの成功率はコロニーPCRと電気泳動によりインサートの全長が維持されているかを確認することにより検証した。インサートの全長が維持されている場合は623bp、欠落している場合は623未満のバンドが検出される。
付属試薬：
・NEB 10-beta/Stable Outgrowth Medium
・pUC19 Transformation Control Plasmid (0.05 ng/μl)
プロトコール
特性
遺伝子型：
F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14- Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)
形質転換効率：
1-3 x 109 cfu/µg pUC19 DNA
薬剤感受性：
| 薬剤 | 濃度 |
| アンピシリン | 100 ug/ml |
| カルベニシリン | 100 ug/ml |
| クロラムフェニコール | 33 ug/ml |
| カナマイシン | 33 ug/ml |
薬剤耐性：
・テトラサイクリン
・ストレプトマイシン
保存温度：
－80℃
