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NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kit

NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kitカタログ番号:E5520

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

E5520S 10 reactions ¥21,600 -80C

製品カテゴリ>グループ

  • DNA修飾酵素&クローニング>クローニングキット

特徴

DNA断片を1ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです! image
  NEBuilder HiFi DNA アッセンブリーは DNA 断片を 1 ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすことができるシステムです。末端に 15 塩基の相同配列がある DNA 断片とマスターミックスを混合し、15 - 60 分間インキュベーションするだけの1 ステップ反応で複数の DNA 断片をアッセンブルすることができます。従来品の Gibson Assembly と比較してアッセンブル効率と正確性が向上しているので、長鎖 DNA、微量 DNA、複数 DNA 断片をより正確かつ高効率でアッセンブルすることができます。
     
 
特長:   Gibson アッセンブリーより高性能:
わずか15-60分間のインキュベーションで終了   より正確かつ高効率でDNAをアッセンブル
平滑末端、5'/3'突出末端DNAをアッセンブル   より微量のDNA(fmol)をアッセンブル
PCRクローニングに最適(3'A/平滑末端産物に対応)   5'末端だけではく3'末端のミスマッチ配列を除去して
6本以上の複数DNA断片の一括アッセンブル  
アッセンブル
一本鎖オリゴDNAと二本鎖DNAをアッセンブル     平滑末端、5'/3'突出末端DNAに対応)
数百kbの長鎖DNA合成      
高い形質転換のNEB 5-alpha コンピテントセルが付属      
     
 
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     図をクリックして拡大できます
 
 
DNA断片を1ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです!
NEBuilder HiFi Worflow                        図を拡大して表示

 

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A:実験手順

1.

 

15-20bpの相同配列を含むDNA断片、ベクター、マスターミックスを混合
2. 50℃で15-60分間インキュベート
3. 大腸菌に形質転換
   
B:原理
1. エキソヌクレアーゼが3'オーバーハングを産生

2.

 

 

1本鎖の相同配列同士がアニーリング

(3'末端のミスマッチ配列はエキソヌクレアーゼが除去)

3.

 

ポリメラーゼが3'方向にDNAを伸長してギャップを埋める
4. DNAリガーゼがニックをシール
   
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メモ

1. 他社同等品とは相同配列の設計が異なる場合があるのでご注意ください。相同配列の設計にはNEBuilder(オンライン・プライマー設計ツール)が便利ですので是非ともご使用ください。

2. インサートDNAのPCRには正確性と増幅性が高いQ5 DNA ポリメラーゼを推奨します。

製品内容

キット内容:

・NEBuilder High-Fidelity Master Mix

・NEB 5-alpha Competent E. coli (High Efficiency)

・SOC Outgrowth Medium

・NEBuilder Positive Control

・pUC19 Transformation Control Plasmid


保存温度:

-80℃*

*製品は-80℃で発送されますが、製品到着後はNEBuilder High-Fidelity Master Mixを-20℃で、コンピテントセルを-80℃で保存してください。