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EnGen sgRNA Synthesis Kit, S. pyogenes

EnGen sgRNA Synthesis Kit, S. pyogenesカタログ番号:E3322

カタログ番号

サイズ

濃度

価格(税別)

保存温度

E3322V 10 reactions ¥36,200 -20C
E3322S 20 reactions ¥70,000 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • DNA修飾酵素&クローニング>その他のDNA修飾酵素

備考

  • 備考:価格改定 (2023年4月1日)

特徴

2019年1月29日 製品内容およびプロトコールが変更されました (詳細)

 

sgRNA 合成キット:1 チューブ、わずか30分の反応で合成
   
  製品の特長: image
  ・ ゲノム編集用の sgRNA 合成
  ・ 1 チューブ、わずか30分の反応でガイドRNA を合成
  ・ DNA、RNAポリメラーゼ、Cas9 Scaffold Oligo を含むキット
  ・ sgRNA 収量は平均 1025 μg、最大 45 μg

 

  図1:1 チューブ、わずか 30分 の反応で ガイド RNA を合成
  image A. ターゲット特異的オリゴDNA* (T7プロモーター配列、20-base のターゲット特異的配列、14-base のCas9 Scaffold Oligo の相補配列から形成)とEnGen sgRNA 反応ミックス、酵素ミックスを室温で混合
     
  B. EnGen sgRNA 反応ミックスに含まれているCas9 Scaffold Oligo とターゲット特異的オリゴ DNA の14-base 相補配列がアニーリング
     
  C. EnGen sgRNA 酵素ミックスに含まれているDNA ポリメラーゼが DNA をそれぞれの3' 方向に伸長し2 本鎖テンプレートDNA を産生
     
  D. EnGen sgRNA 酵素ミックスに含まれているRNA ポリメラーゼがT7 プロモーターよりRNAの転写を行いターゲット特異的sgRNA を合成
     
  *ターゲット特異的オリゴDNA の設計にはオンラインツールが便利です!
  image

 

 図2: 合成 sgRNA は電気泳動で確認可能    図3: Cas9 によるDNA切断
image   image
3種類の合成sgRNAを10% Novex TBE-Urea ゲル(SYBR Goldを含む)で電気泳動を行った。   PvuII-pBR322 DNA(直鎖状)をCas9とsgRNAにより切断し、アガロース・ゲルで解析した。

キット内容

・EnGen sgRNA Enzyme Mix

・EnGen 2X sgRNA Reaction Mix, S. pyogenes

・DNase I(RNase-free)

・EnGen sgRNA Control Oligo

別途必要な試薬等

・オリゴ DNA (EnGen sgRNA Template Oligo Designerが便利です!

・RNA 定量試薬・機器(吸光度計やNanoDrop など)

・RNA 精製試薬 【RNA Clean & Concentrator-25 (Zymo Research, CAT #R1017, #R1018)など】

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