Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格(税別) |
保存温度 |
---|---|---|---|---|
E3006S | 200 rxns | 2X | ¥30,800 | -20C |
E3006L | 500 rxns | 2X | ¥69,000 | -20C |
E3006X | 1,000 rxns | 2X | ¥121,000 | -20C |
E3006E | 2,500 rxns | 2X | ¥266,400 | -20C |
製品カテゴリ>グループ
- リアルタイム PCR>1-ステップ RT-qPCR (プローブ)
備考
- 備考:価格改定 (2023年4月1日)
特徴
*新型コロナウイルス RNA の検出に関する最新論文とアプリケーションノートを公開しました(2020 年 4 月) |
*「病原体検出マニュアル 2019-nCoV」における Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit の使用例 を公開しました(2020 年 9 月) |
特長: |
・RNA 定量用 1-ステップ RT-qPCR キット |
・プローブ・アッセイ用試薬 |
・Hot Start DNAポリメラーゼと Warm Start 逆転写酵素の採用により、非特異的反応が抑制され、室温でのセットアップが可能 |
・ピペッティング、分注ミスを低減する青色の 2X マスターミックス* |
・補正用ダイが含まれており、ROX の添加は不要 |
*青色トラッキング・ダイは qPCR 反応やシグナルに影響を及ぼすことはありません。 |
図1:ルナ 1 ステップ RT-qPCR キット は高い感度と再現性を示す |
0.1 pg - 1 μg の 広範囲のトータル RNA から高い再現性で 1 ステップ RT-qPCR ができる。ヒト GAPD をターゲットとしてN=8で RT-qPCR をおこなった (N=8) 。逆転写反応は 55 ℃、10分間で実施した。 |
図2:RNA サンプルを問わず、正確に検出・定量が可能、さらに複数ターゲットの同時検出も可能 |
Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit を用いたワンステップ RT-qPCR により 3 種類のターゲットを同時に増幅したところ、いずれも良好に増幅・定量できることが示された。1 pg–1 µg の Jurkatトータル RNA をテンプレートとした。ターゲットはヒト GAPDH、Ribosomal Protein L32g、Pl3-KinasRelated Kinase SMG1 である。それぞれ異なるコピー数であるため、異なるプライマー濃度を使用した(低コピーの SMG1 は 0.4 µM、高コピーの GAPDH と L32gは 0.2 µM)。各ターゲットのプローブには異なる蛍光を使用した(FAM、HEX、Cy5)。
|
図3:高い特異性と安定した性能 |
Jurkat ゲノム DNA または cDNA をテンプレートとして、各社製品を用いて、様々なコピー数、長さ、GC 含量の 7 領域を対象に RT-qPCR を行った結果、NEB のルナが最も高い特異性(検出率)を示した。各社試薬の推奨条件に従い、2 名が個別に実験を行った。増幅効率、感度(低インプットの検出)、非特異的増幅の有無について結果を評価した(ΔCq= 最低インプットの平均 Cq – 非テンプレートコントロールの平均 Cq)。また一貫性と再現性、増幅曲線の信頼性を Quality Score として評価に加えた。各社製品の詳細は以下のとおり: Quanta, qScript™ XLT 1-Step RT-qPCR ToughMix®; ABI, TaqMan® RNA-to-Ct 1-Step Kit; QIAGEN, QuantiFast® Probe RT-PCR Kit; Bio-Rad, iTaq™ Universal Probes One-Step Kit; Promega®, GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR System。 |
“dots in boxes(2番目の図)”の詳細は NEB TV Japan(日本語字幕付動画)を参照。 |
プロトコール
製品内容
構成:
・Nuclease-free Water
・Luna WarmStart RT Enzyme Mix
・Luna Universal Probe One-Step Reaction Mix
保存温度:
-20℃
NEB TV Japan:リアルタイムPCR
リアルタイム PCR の原理 |
Dots in Boxes 法による qPCR データの可視化と評価 |
|
||
NEB TV Japan 一覧(日本語字幕付) |
メモ
1. Primer Design
The use of qPCR primer design software (e.g., Primer3) maximizes the likelihood of amplification success while minimizing nonspecific amplification and primer dimers. Targets with balanced GC/AT content (40–60%) tend to amplify most efficiently. Where possible, enter sufficient sequence around the area of interest to permit robust primer design and use search criteria that permit cross-reference against relevant sequence databases (to avoid potential off-target amplification). It is advisable to design primers across known RNA splicing sites in order to prevent amplification from genomic DNA.
関連製品
・Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit (1 ステップ RT-qPCR キット、ダイ)
・Luna Universal Probe qPCR Master Mix (qPCR マスターミックス、プローブ)
・Luna Universal qPCR Master Mix (qPCR マスターミックス、ダイ)
・Antarctic Thermolabile UDG (キャリーオーバー防止用)