E. coli DNA Ligase
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格 |
保存温度 |
|---|---|---|---|---|
| M0205S | 200 units | 10,000 units/ml | ¥11,700 | -20C |
| M0205L | 1,000 units | 10,000 units/ml | ¥46,700 | -20C |
製品カテゴリ>グループ
- ＤＮＡ修飾酵素&クローニング>リガーゼ＆ライゲーションキット
特徴
概要：
隣接した2本鎖DNA内の付着末端の5'リン酸末端と3'ヒドロキシル末端とのホスホジエステル結合の形成を触媒する。
由来：
プロファージλgt4 lop 11 lig+Sam 7を有するE. coli594 (su-)株からPanasenkoらの手順により精製。
アプリケーション：
Okayama and Berg cDNA cloning
付属試薬：
E.coli DNA Ligase Reaction Buffer
プロトコール
酵素特性
ユニット定義：
1ユニットは、全反応容量20 μl中、16 ℃、30分で、λDNA (5'DNA末端濃度0.12 μM、300 μg/ml) のHindIII断片の50%をライゲーションするために必要な酵素量として定義される。
反応条件：
1X E. coli DNAリガーゼ反応バッファー[30 mM Tris-HCl (pH 8.0)、4 mM MgCl2、1 mM DTT、26 μM NAD+,50μg/ml BSA]。
16 ℃でインキュベート。
1X E.coli DNA Ligase Reaction Bufferの組成：
・30 mM Tris-HCl
・4 mM MgCl2
・26 μM NAD
・1 mM DTT
・50 μg/ml BSA
pH 8 @ 25°C
保存温度：
-20℃
酵素保存液の組成：
・300 mM NaCl
・10 mM Tris-HCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・500 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C
熱による不活性化：
65℃、20分間
比活性：
6,000 units/mg
メモ
1. 補因子としてNAD+を必要とする。
2. 平滑末端同士のライゲーション効率は極めて低い。
3. RNAとDNAのライゲーションはできない。
4. 本製品は付着末端を持つDNA同士のライゲーションに使用する。
