EnGen Spy Cas9 Nickase
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格 |
保存温度 |
|---|---|---|---|---|
| M0650S | 70 pmol | 1 μM | ¥9,600 | -20C |
| M0650T | 400 pmol | 20 μM | ¥24,200 | -20C |
製品カテゴリ>グループ
- ＤＮＡ修飾酵素&クローニング>ヌクレアーゼ
備考
- 備考：価格改定 (2022年10月1日)
特徴
| ターゲット DNA の片鎖のみ切断する Cas9 ニッカーゼ |
| 特長： |
| ・ DNA の片鎖のみ切断してニックを挿入する Cas9 ニッカーゼ |
| ・ 近接 (0-20 bp 程度) する 2 箇所のターゲット DNA を片鎖ずつ切断することによりオフ・ターゲット切断を低減 |
| ・ RuvC ヌクレアーゼ・ドメイン D10A 点変異体 |
| ・ N, C 末端に SV40 T 抗原の核局在シグナル (NLS) 付加 |
| ・ 高濃度品 (20 µM：M0650T) と通常濃度品 (1 µM：M0650S) を提供 |
 |
EnGen Spy Cas9 Nickase はガイド RNA (gRNA, sgRNA) と複合体を形成してターゲット DNA の片鎖 (Target Strand) のみを切断してニックを挿入する Cas9 ニッカーゼです。
EnGen Spy Cas9 Nickase は RuvC ヌクレアーゼ・ドメイン D10A に点変異が導入されているため、DNA の両鎖を切断することはできません。ターゲット DNA にニックを挿入するには、DNA の Target Strand に相補的なgRNA、None-Target Strand (反対側の鎖) にPAM (NGG配列) が必要です。ターゲット DNA は Target Strand のみ切断され、ニックが挿入されます。
近接 (0-20 bp 程度) する ２ 箇所のターゲット DNA を片鎖ずつ切断することによりオフ・ターゲット切断を低減したゲノム編集が可能となります (ただし、２ 箇所のターゲット DNA に、それぞれ PAM が必要です) 。
EnGen Spy Cas9 Nickase の N, C 末端に SV40 T 抗原の核局在シグナル (NLS) 付加されています。
|
 |
プロトコール
プロトコール
酵素特性
由来：
リコンビナント酵素（Streptococcus Pyogenes の Cas9 遺伝子の RuvC ヌクレアーゼドメインの D10A 点変異体 を大腸菌で発現、N 末端に 6x His が付属）
濃度：
・M0650T：20 µM (3.2 mg/ml）
・M0650S：1 µM (0.16 mg/ml）
容量：
・M0650T : 20 ul
・M0650S : 70 ul
付属試薬：
・10x NEBuffer 3.1
酵素溶液組成：
・300 mM NaCl
・10 mM Tris-HCl
・0.1 mM EDTA
・1 mM DTT
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C
1x NEBuffer 3.1 組成：
・100 mM NaCl
・50 mM Tris-HCl
・10 mM MgCl2
・100 ug/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C
保存温度：
-20C
熱による不活性化：
不可
関連製品
・EnGen Cas9 NLS, S. pyogenes ： 最も一般的なゲノム編集用 Cas9 ヌレクアーゼ
・EnGen Spy Cas9 Nickase ： ターゲット DNA の片鎖のみ切断する Cas9 ニッカーゼ
・EnGen Lba Cas12a (Cpf1) ： AT リッチ、イントロン領域のゲノム編集に有効な Cas12a ヌクレアーゼ
・EnGen Spy dCas9 (SNAP-tag) ： 様々なアプリケーションに応用可能な DNA 切断活性欠損型 Cas9 タンパク質
・EnGen sgRNA Synthesis Kit ： sgRNA 合成キット（1チューブ、わずか30分の反応で合成）
・EnGen Mutation Detection Kit ： ゲノム編集効率（変異）検証キット
