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EnGen Spy Cas9 Nickase

EnGen Spy Cas9 Nickaseカタログ番号:M0650

カタログ番号

サイズ

濃度

価格(税別)

保存温度

M0650S 70 pmol 1 μM ¥10,400 -20C
M0650T 400 pmol 20 μM ¥26,200 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • DNA修飾酵素&クローニング>ヌクレアーゼ

備考

  • 備考:価格改定 (2023年4月1日)

特徴

ターゲット DNA の片鎖のみ切断する Cas9 ニッカーゼ
 
特長:
 ・ DNA の片鎖のみ切断してニックを挿入する Cas9 ニッカーゼ
 ・ 近接 (0-20 bp 程度) する 2 箇所のターゲット DNA を片鎖ずつ切断することによりオフ・ターゲット切断を低減
 ・ RuvC ヌクレアーゼ・ドメイン D10A 点変異体
 ・ N, C 末端に SV40 T 抗原の核局在シグナル (NLS) 付加
 ・ 高濃度品 (20 µM:M0650T) と通常濃度品 (1 µM:M0650S) を提供

 

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EnGen Spy Cas9 Nickase はガイド RNA (gRNA, sgRNA) と複合体を形成してターゲット DNA の片鎖 (Target Strand) のみを切断してニックを挿入する Cas9 ニッカーゼです。

 

EnGen Spy Cas9 Nickase は RuvC ヌクレアーゼ・ドメイン D10A に点変異が導入されているため、DNA の両鎖を切断することはできません。ターゲット DNA にニックを挿入するには、DNA の Target Strand に相補的なgRNA、None-Target Strand (反対側の鎖) にPAM (NGG配列) が必要です。ターゲット DNA は Target Strand のみ切断され、ニックが挿入されます。

 

 

近接 (0-20 bp 程度) する 2 箇所のターゲット DNA を片鎖ずつ切断することによりオフ・ターゲット切断を低減したゲノム編集が可能となります (ただし、2 箇所のターゲット DNA に、それぞれ PAM が必要です) 。

 

EnGen Spy Cas9 Nickase の N, C 末端に SV40 T 抗原の核局在シグナル (NLS) 付加されています。

 

 

 

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プロトコール

プロトコール(英語)

酵素特性

由来:

リコンビナント酵素(Streptococcus Pyogenes の Cas9 遺伝子の RuvC ヌクレアーゼドメインの D10A 点変異体 を大腸菌で発現、N 末端に 6x His が付属)


濃度:

M0650T:20 µM (3.2 mg/ml)

・M0650S:1 µM (0.16 mg/ml)

 

容量:

・M0650T : 20 ul

・M0650S : 70 ul 

 

付属試薬:

・10x NEBuffer 3.1

 

酵素溶液組成:

・300 mM NaCl

10 mM Tris-HCl

0.1 mM EDTA

1 mM DTT

50% Glycerol

pH 7.4 @ 25°C

 

1x NEBuffer 3.1 組成:

100 mM NaCl

50 mM Tris-HCl

10 mM MgCl2

・100 ug/ml BSA

pH 7.9 @ 25°C

 

保存温度:

-20C

 

熱による不活性化:

不可

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