EnGen Lba Cas12a (Cpf1) (M0653) - New England Biolabs Japan

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EnGen Lba Cas12a (Cpf1)

EnGen Lba Cas12a (Cpf1)

EnGen Lba Cas12a (Cpf1)カタログ番号:M0653

カタログ番号	サイズ	濃度	価格	保存温度
M0653S	70 pmol	1 μM	¥11,200	-20C
M0653T	2,000 pmol	100 μM	¥40,000	-20C

製品カテゴリ>グループ

ＤＮＡ修飾酵素&クローニング>ヌクレアーゼ

備考

備考：価格改定 (2022年10月1日)

特徴

AT リッチ、イントロン領域のゲノム編集に有用な Cas12a ヌクレアーゼ

特長：

・ PAM (TTTN配列) を認識するため、ゲノム編集可能な領域を拡大

・短い gRNA (41-44 塩基) でゲノム編集可能

・ 16～48 ℃で活性を示すので、幅広い温度条件下でゲノム編集が可能

・ N, C 末端に SV40 T 抗原の核局在シグナルを付加

・ Lachnospiraceae bacterium 由来

・高濃度品 (100 μM：M0653T) と通常濃度品（1 μM：M0653S）を提供

Cas9 とは異なる PAM (TTTN配列) を認識してターゲット DNA を切断

EnGen Lba Cas12a (Cpf1) はガイド RNA (gRNA, sgRNA) と複合体を形成してターゲット DNA を特異的に切断する Cas12a エンドヌクレアーゼである。ターゲット DNA を切断するには、Target Strand に相補的なgRNA、None-Target Strand (反対側の鎖) に PAM (TTTN配列) が必要である。ターゲット DNA は PAM の 3’ 側 18 bp 以内の箇所で Target、None-Target Strand 両鎖とも切断され 5' 突出末端となる。

EnGen Lba Cas12a は PAM (TTTN 配列) を認識するため、AT リッチ、イントロン領域のゲノム編集に有用である。

16～48 ℃で活性を示すので、幅広い温度条件下でゲノム編集が可能

A) 代表的なモデル生物のゲノム編集温度。EnGen Lba Cas12a は 16～48°C で活性を示すので、低温での反応が必要となる Zebrafish、Xenopus、C. elegans などのゲノム編集に有用である。

B) 各温度における DNA 切断活性。EnGen Lba Cas12a (Cpf1) は Asp Cas12a (Cpf1) に比べて16～48°Cの幅広い温度で DNA 切断活性を示す。Lba あるいは Asp Cas12a タンパク質にガイド RNA を結合させて RNP 複合体を形成させた。DNA ターゲットには 5' 末端に FAM ラベルした PCR 産物を使用した。RNP 複合体と DNA ターゲットを 10:1 のモル比で混ぜた後、10分間、各温度でインキュベートした。DNA 切断産物はキャピラリー電気泳動で測定を行い、二連実験を行った。

プロトコール

プロトコール＆マニュアル（英語）

酵素特性

由来：

リコンビナント酵素（Lachnospiraceae bacterium ND2006 の Cas12a 遺伝子を大腸菌で発現、N 末端に 6x His が付属）

濃度：

・M0653T：100 µM (15.1 mg/ml）

・M0653S：1 µM (0.15 mg/ml）

付属試薬：

・10x NEBuffer r2.1

酵素溶液組成：

・500 mM NaCl

・20 mM sodium acetate

・0.1 mM EDTA

・1 mM DTT

・0.1 mM TCEP

・50% Glycerol

pH 6.0 @ 25°C

1x NEBuffer r2.1 組成：

・50 mM NaCl

・10 mM Tris-HCl

・10 mM MgCl2

・100 ug/ml Recombinant Albumin

pH 7.9 @ 25°C

保存温度：

-20C

熱による不活性化：

65℃、10分間