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O-Glycosidase

O-Glycosidaseカタログ番号:P0733

カタログ番号

サイズ

濃度

価格(税別)

保存温度

P0733S 2,000,000 units 40,000,000 units/ml ¥25,600 -20C
P0733L 10,000,000 units 40,000,000 units/ml ¥102,000 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 糖鎖生物学&プロテインツール>グリコシダーゼ

備考

  • 備考:価格改定 (2023年4月1日)

特徴

2015年3月より反応バッファーの名称が変更されました。詳細はこちら

 

特長:

・糖タンパク質からO結合型ジサッカライドをCore1 およびCore3 で切断

 

説明:

O-Glycosidase(Endo-α-N-Acetylgalactosaminidase) は糖タンパク質からO結合型ジサッカライドをCore1およびCore3で切断する。

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由来:

Enterococcus faecalisからクローニングしたO-Glycosidase遺伝子を保有する大腸菌

 

付属試薬:

・Glycoprotein Denaturing Buffer (10X)

・GlycoBuffer 2 (10X)

・NP-40 (10%)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1 unitは、全反応液100 μl中、37℃、1 時間において、5mgのneuraminidase分解済みFetuin(非変性)から0.68nmol のO結合性ジサッカライドを除去するために必要な酵素量として定義(1 unitのO-glycosidaseとPNGase Fはそれぞれ等モルのO結合型ジサッカライドとN結合型オリゴ糖を切断)

 

ユニットアッセイ条件:

5 mgの非変性Fetuin(Neuraminidaseでシアル酸除去したもの)にGlycoBuffer 2およびO-Glycosidaseを加えて37℃で1時間インキュベーション。Morgan and Elson AssayにてO結合型ジサッカライドを測定。

 

保存温度:

-20℃

 

1X Glycoprotein Denaturing Bufferの組成:

・0.5% SDS

・40 mM DTT

 

1X NP-40の組成:

・1% NP-40

 

1X GlycoBuffer 2の組成:

・50 mM sodium phosphate (pH7.5@25℃)

 

酵素保存液の組成:

・20 mM Tris-HCl

・50 mM NaCl

・1 mM Na2EDTA

pH 7.5 @ 25°C

 

熱による不活性化:

65℃、10分間

 

分子量:

約14.7 kDa

メモ

1. O-GlycosidaseはSDSで阻害されるため、糖タンパク質変性後は必ずNP-40を添加する。NP-40によるSDS中和機構は分かっていない。

2. 未変性の糖タンパク質の脱グリコシル化を行う場合、立体構造上O-Glycosidaseが切断サイトにアクセスしづらく、脱グリコシル化効率が低下する傾向にある。酵素量およびインキュベーション時間、反応温度を最適化する。

3. ほとんどの糖タンパク質ではO結合型ジサッカライドにシアル酸などが結合している。この場合はO-GlycosidaseだけでO結合型糖鎖の切断はできないため、Neuraminidaseと併用する。