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Bsp1286I

Bsp1286Iカタログ番号:R0120

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0120S 500 units 5,000 units/ml ¥9,400 -20C
R0120L 2,500 units 5,000 units/ml 販売終了 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

特徴

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認識配列:

Recognition

 | Isoschizomers

由来:
Bacillus sphaericus (IAM 1286)からクローニングしたBsp1286I遺伝子を有する大腸菌

 

付属試薬:

CutSmart Buffer (10X)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのλ DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X CutSmart Buffer

37℃でインキュベーション。

 

1X CutSmart Buffer 組成:

・50 mM Potassium Acetate
・20 mM Tris-acetate
・10 mM Magnesium Acetate
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 25 % 
NEBuffer 2.1  : 25 %
NEBuffer 3.1  : 25 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

 

希釈バッファー:

Diluent A

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・50 mM KCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・400 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

65℃、20分間

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : 感受性なし

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

  1. Bsp1286Iは、6つの固有の配列、GGGCCC、GAGCCC (GGGCTCに相補的)、GTGCCC (GGGCACに相補的)、GAGCAC、GTGCAC、GAGCTC (GTGCTCに相補的)を認識する。
  2. dam、dcm、または哺乳類のCpGメチル化による影響を受けない。
  3. グリセロール濃度が>5%の場合、スター活性を生じることがある。

参考文献

  1. Ho, C.K. et al. (2004). Structure. 12, 327-339.
  2. Ho, C.K. and Shuman, S. (2002). Proc. Natl. Acad. Sci. USA.. 99, 12709-12714.
  3. Nandakumar, J. et al. (2004). J. Biol. Chem.. 279, 31337-31347.
  4. Aravin, A. and Tusch, T. (2005). FEBS Letters. 579, 5830-5840.
  5. Pfeffer, S. et al. (2005). Nat. Meth.. 2, 269-276.