NheI (R0131) - New England Biolabs Japan

NheI

NheIカタログ番号:R0131

カタログ番号	サイズ	濃度	価格（税別）	保存温度
R0131S	1,000 units	10,000 units/ml	販売終了　代替品：R3131	-20C
R0131L	5,000 units	10,000 units/ml	販売終了　代替品：R3131	-20C
R0131M	5,000 units	50,000 units/ml	販売終了　代替品：R3131	-20C

性能を向上しつつも、同価格で提供しているNheI-HFのご使用をお勧めします！

認識配列:

| Isoschizomers

由来:
Neisseria mucosa heidelbergensis (ATCC 25999)からクローニングされたNheI遺伝子を有するE. coli株

付属試薬：

NEBuffer 2.1 (10X)

ユニット定義：

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのλ DNA (HindIII digest)を消化するために必要な酵素量として定義される。

反応条件：

1X NEBuffer 2.1

37℃でインキュベーション。

1X NEBuffer 2.1 組成：

・50 mM NaCl
・10 mM Tris-HCl
・10 mM MgCl2
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

各バッファー中における活性：

希釈バッファー：

Diluent C

保存温度：

－20℃

保存液組成：

・10 mM Tris-HCl
・250 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
・0.15% Triton® X-100
pH 7.4 @ 25°C

熱による不活性化：

65℃、20分間

メチル化感受性：

dam methylation	：	感受性なし
dcm methylation	：	感受性なし
CpG Methylation	：	オーバーラップするメチル化配列の幾つかの組み合わせによってブロックされる

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

・	青/白スクリーニングアッセイ
	10倍過剰の制限酵素でDNAベクターを線状化し、再ライゲーションした後、LacZ beta遺伝子を発現する大腸菌株に形質転換し、白コロニーの出現頻度が1%未満であることを確認。

・	エンドヌクレアーゼ活性（ニッキング）
	スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。

・	エキソヌクレアーゼ活性（同位体標識塩基のリリース）
	同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。

・	ライゲーションおよびリカッティング
	制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。

・	非特異的DNase活性（16時間）
	DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。