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TaqI-v2 ( 旧名称:TaqαI )

TaqI-v2 ( 旧名称:TaqαI )カタログ番号:R0149

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0149S 4,000 units 20,000 units/ml ¥8,900 -20C
R0149T 4,000 units 100,000 units/ml ¥8,900 -20C
R0149L 20,000 units 20,000 units/ml ¥36,000 -20C
R0149M 20,000 units 100,000 units/ml ¥36,000 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

備考

  • 備考:2020年2月製品名変更 ( 旧: TaqαI )

特徴

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認識配列:

Recognition

 | Isoschizomers

由来:
TaqαIを過剰に産生するプラスミド(F. BaranyNEBクローンを使用)を有する大腸菌TaqαIは末端アミノ末端2残基が置換されている。これによって、酵素活性に影響を与えることなく発現効率が向上される。

 

付属試薬:

・CutSmart Buffer (10X)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、65℃で1時間において、1 μgのλ DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X CutSmart Buffer

65℃でインキュベーション。

 

1X CutSmart Buffer 組成:

・50 mM Potassium Acetate
・20 mM Tris-acetate
・10 mM Magnesium Acetate
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 50 % 
NEBuffer 2.1  : 100 %
NEBuffer 3.1  : 50 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

※2020年2月情報更新。詳細は、メモ欄を参照 

 

希釈バッファー:

Diluent B

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・300 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・500 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

不可

 

メチル化感受性:

dam methylation  : オーバーラップするメチル化配列によってブロックされる
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : 感受性なし

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

1. TaqI-v2 は末端アミノ酸が置換されている。この置換により発現効率が向上されるが、酵素活性には影響しない。

2. オーバーラップする dam メチル化によってブロックされる。

3. 37℃ でインキュベーションした場合の活性は 10 %である。

 

 

2020年2月6日:各バッファー中における活性を更新


【更新箇所および内容】

NEBuffer 2.1 75 % → 100 %

NEBuffer 3.1 100 %  → 50 %