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HgaI

HgaIカタログ番号:R0154

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0154S 100 units 2,000 units/ml ¥11,800 -20C
R0154L 500 units 2,000 units/ml 販売終了 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

備考

  • 備考:販売終了(2020年12月) Sサイズは販売継続

特徴

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認識配列:

Recognition

 | Isoschizomers

由来:
Haemophilus gallinarum (ATCC 14385)からクローニングされたHgaI遺伝子を有する大腸菌

 

付属試薬:

NEBuffer 1.1 (10X)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのφX174 DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X NEBuffer 1.1

37℃でインキュベーション。

 

1X NEBuffer 1.1 組成:

・10 mM Bis-Tris-Propane-HCl
・10 mM MgCl2
・100 μg/ml BSA
pH 7 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 100 % 
NEBuffer 2.1  : 100 %
NEBuffer 3.1  : 25 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

 

希釈バッファー:

Diluent A

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・50 mM KCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・50% Glycerol
・200 μg/ml BSA
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

65℃、20分間

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : ブロックされる

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

エンドヌクレアーゼ活性(ニッキング)
  スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

  1. 知られている3,000以上の制限酵素の中でも、HgaIは4塩基以上の突出末端を生成する数少ない酵素の1つである。1 μg当たりのDNAに対し、5 unit以上のHgaIで1時間以上インキュベーションして過剰に切断することは推奨しない。
  2. 哺乳類ゲノムDNAの切断は、CpGメチル化によってブロックされる。
  3. 1µgのDNAに対して、5 units以上のHgaIを使用して1時間以上インキュベーションすることは推奨しない。
  4. 反応時間が長い、酵素濃度が高い、グリセロール濃度が>5%の場合、スター活性を生じることがある。
  5. HgaIは基質DNAが無くなり次第、速やかに活性を失う。また37℃で1時間インキュベーションすることで失活する。