1. ホーム
  2. 製品一覧
  3. SacI

SacI

SacIカタログ番号:R0156

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0156S 2,000 units 20,000 units/ml 販売終了、代替品:R3156S -20C
R0156L 10,000 units 20,000 units/ml 販売終了、代替品:R3156L -20C
R0156M 10,000 units 100,000 units/ml 販売終了、代替品:R3156M -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

備考

  • 備考:販売終了(2021年12月) 代替品:R3156L

特徴

 

現在ハイフィデリティー(HF)バージョンも販売中です。

性能を向上しつつも、同価格で提供しているSacI-HFのご使用をお勧めします!

 

 

image image image image image image image        

 

認識配列:

image

Isoschizomers

 

由来:

Streptomyces achromogenes (ATCC 12767)由来のSacI遺伝子を有する大腸菌

 

付属試薬:

NEBuffer 1.1 (10X)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのλ DNA (HindIII digest)を消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X NEBuffer 1.1

37℃でインキュベーション。

 

1X NEBuffer 1.1 組成:

・10 mM Bis-Tris-Propane-HCl
・10 mM MgCl2
・100 μg/ml BSA
pH 7 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 100 %
NEBuffer 2.1  : 50 %
NEBuffer 3.1  : 10 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

 

希釈バッファー:

Diluent A

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・100 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

65℃、20分間

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : 感受性なし

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

青/白スクリーニングアッセイ

  10倍過剰の制限酵素でDNAベクターを線状化し、再ライゲーションした後、LacZ beta遺伝子を発現する大腸菌株に形質転換し、白コロニーの出現頻度が1%未満であることを確認。
   

エンドヌクレアーゼ活性(ニッキング)
  スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。
   
エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

1.SacIは50 mM以上の塩濃度で阻害される。残留塩を含むミニプレップDNAは切断されないことがあるので、70%エタノールで洗浄または透析により脱塩することを推奨する。

2. SacI はGAGmCTCのシトシンメチル化に感受性があるが、GAGCTmC のシトシンメチル化及びGmAGCTCのアデニンメチル化には感受性が無い。