NotI
NotIカタログ番号:R0189
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格 |
保存温度 |
|---|---|---|---|---|
| R0189S | 500 units | 10,000 units/ml | ¥9,800 | -20C |
| R0189L | 2,500 units | 10,000 units/ml | ¥40,400 | -20C |
| R0189M | 2,500 units | 50,000 units/ml | ¥40,400 | -20C |
製品カテゴリ>グループ
- 制限酵素>制限酵素
特徴
現在ハイフィデリティー(HF)バージョンも販売中です。
性能を向上しつつも、同価格で提供しているNotI-HFのご使用をお勧めします！
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認識配列:
Isoschizomers
由来:
Nocardia otitidiscaviarum (ATCC 14630)からクローニングされたNotI遺伝子を有するE. coli株
付属試薬：
NEBuffer 3.1 (10X)
プロトコール
酵素特性および使用方法
ユニット定義：
1ユニットは、全反応容量50µl中、37℃、1時間において、1µgのpBC4 DNAを切断するために必要な酵素量として定義される。
反応条件：
1X NEBuffer 3.1
37℃でインキュベーション。
1X NEBuffer 3.1 組成：
・100 mM NaCl
・50 mM Tris-HCl
・10 mM MgCl2
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C
各バッファー中における活性：
| NEBuffer 1.1 | ： | 10 % |
| NEBuffer 2.1 | ： | 50 % |
| NEBuffer 3.1 | ： | 100 % |
| CutSmart Buffer | ： | 25 % |
希釈バッファー：
Diluent C
保存温度：
－20℃
保存液組成：
・10 mM Tris-HCl
・250 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
・0.15% Triton® X-100
pH 7.4 @ 25°C
熱による不活性化：
65℃、20分間
メチル化感受性：
| dam methylation | ： | 感受性なし |
| dcm methylation | ： | 感受性なし |
| CpG Methylation | ： | ブロックされる |
品質管理
以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。
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・ |
エンドヌクレアーゼ活性（ニッキング） |
| スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。 | |
| ・ | エキソヌクレアーゼ活性（同位体標識塩基のリリース） |
| 同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。 | |
| ・ | ライゲーションおよびリカッティング |
| 制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。 | |
| ・ | 非特異的DNase活性（16時間） |
| DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。 |
メモ
- 哺乳類ゲノムDNAの切断は、CpGメチル化によってブロックされる。
- 直鎖状DNAに比べてスーパーコイルプラスミドを完全に切断するには最大5倍量のNotIを必要とすることがある。
