DpnII (R0543) - New England Biolabs Japan

DpnII

DpnIIカタログ番号:R0543

カタログ番号	サイズ	濃度	価格（税別）	保存温度
R0543S	1,000 units	10,000 units/ml	¥13,400	-20C
R0543T	1,000 units	50,000 units/ml	¥13,400	-20C
R0543L	5,000 units	10,000 units/ml	¥55,200	-20C
R0543M	5,000 units	50,000 units/ml	¥55,200	-20C

認識配列:

| Isoschizomers

由来:
Diplococcus pneumoniae G41 (S. Lacks)からクローニングされたDpnII遺伝子を有する大腸菌

付属試薬：

NEBuffer DpnII (10X)

ユニット定義：

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのλ DNA (dam-)を消化するために必要な酵素量として定義される。

反応条件：

1X NEBuffer DpnII

37℃でインキュベーション。

1X NEBuffer DpnII 組成：

・50 mM Bis-Tris-HCl
・100 mM NaCl
・10 mM MgCl2
・1 mM DTT
pH 6 @ 25°C

各バッファー中における活性：

希釈バッファー：

Diluent A

B保存温度：

－20℃

保存液組成：

・10 mM Tris-HCl
・300 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・500 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

熱による不活性化：

65℃、20分間

メチル化感受性：

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

・	エンドヌクレアーゼ活性（ニッキング）
	スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。

・	エキソヌクレアーゼ活性（同位体標識塩基のリリース）
	同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。

・	ライゲーションおよびリカッティング
	制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。

・	非特異的DNase活性（16時間）
	DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

DpnIIとSau3AIはMboIのイソシゾマーである。
IDpnIIによる切断で生じた5'GATC突出末端は、BamHI、BclI、BglII、MboI、Sau3AI、およびBstYIによって生じたDNA断片に効率的にライゲート可能である。
damのメチル化によってブロックされる。
NEBuffer 3.1中では、スター活性を生じることがある。