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DpnII

DpnIIカタログ番号:R0543

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0543S 1,000 units 10,000 units/ml ¥13,000 -20C
R0543T 1,000 units 50,000 units/ml ¥13,000 -20C
R0543L 5,000 units 10,000 units/ml ¥52,600 -20C
R0543M 5,000 units 50,000 units/ml ¥52,600 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素
  • 制限酵素>エピジェネティクス解析用制限酵素(EpiMark)
  • エピジェネティクス>メチル化解析用制限酵素

備考

  • 備考:2020年4月価格改定

特徴

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認識配列:

Recognition

 | Isoschizomers

由来:
Diplococcus pneumoniae G41 (S. Lacks)からクローニングされたDpnII遺伝子を有する大腸菌

 

付属試薬:

NEBuffer DpnII (10X)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのλ DNA (dam-)を消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X NEBuffer DpnII

37℃でインキュベーション。

 

1X NEBuffer DpnII 組成:

・50 mM Bis-Tris-HCl
・100 mM NaCl
・10 mM MgCl2
・1 mM DTT
pH 6 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 25 % 
NEBuffer 2.1  : 25 %
NEBuffer 3.1  : 100 % 
CutSmart Buffer  : 25 %

 

希釈バッファー:

Diluent A

 B保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・300 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・500 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

65℃、20分間

 

メチル化感受性:

dam methylation  : ブロックされる
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : 感受性なし

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

エンドヌクレアーゼ活性(ニッキング)
  スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。
   
エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

  1. DpnIIとSau3AIはMboIのイソシゾマーである。
  2. IDpnIIによる切断で生じた5'GATC突出末端は、BamHI、BclI、BglII、MboI、Sau3AI、およびBstYIによって生じたDNA断片に効率的にライゲート可能である。
  3. damのメチル化によってブロックされる。
  4. NEBuffer 3.1中では、スター活性を生じることがある。