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Acc65I

Acc65Iカタログ番号:R0599

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0599S 2,000 units 10,000 units/ml ¥13,000 -20C
R0599L 10,000 units 10,000 units/ml ¥53,000 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

特徴

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認識部位:

Recognition

  isoschizomers 

 

由来:
Acinetobacter calcoaceticus 65 (S.K. Degtyarev)からクローニングされたAc c65I遺伝子を有する大腸菌。 

 

付属試薬:
NEBuffer 3.1 (10X)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:
1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのpBC4 DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X NEBuffer 3.1

37℃でインキュベーション。

 

1X NEBuffer 3.1 組成:

・100 mM NaCl
・50 mM Tris-HCl
・10 mM MgCl2
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 10 % 
NEBuffer 2.1  : 75 %
NEBuffer 3.1  : 100 % 
CutSmart Buffer  : 25 %

 

希釈バッファー:

Diluent A

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・100 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

65℃、20分間

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : オーバーラップする幾つかの組み合わせによってブロックされる
CpG Methylation  : オーバーラップする幾つかの組み合わせによってブロックされる

 

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

青/白スクリーニングアッセイ

  10倍過剰の制限酵素でDNAベクターを線状化し、再ライゲーションした後、LacZ beta遺伝子を発現する大腸菌株に形質転換し、白コロニーの出現頻度が1%未満であることを確認。
   

エンドヌクレアーゼ活性(ニッキング)
  スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。
   
エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

 

 

メモ

  1. Acc65IはKpnlのイソシゾマーである。
  2. NEBuffer 2.1中ではスター活性を生じる場合がある。