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AcuI

AcuIカタログ番号:R0641

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0641S 300 units 5,000 units/ml ¥12,200 -20C
R0641L 1,500 units 5,000 units/ml ¥49,500 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

特徴

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認識部位:

Recognition

  isoschizomers 

由来:
Acinetobacter calcoaceticus (S.K. Degtyarev)からクローニングされたAcuI遺伝子を有する大腸菌。

 

付属試薬:
CutSmart Buffer (10X)

S-adenosylmethionine (SAM) (32 mM)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:
1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのλ DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X CutSmart Buffer

40 µMのS-adenosylmethyonine (SAM)を添加。

37℃でインキュベーション。

 

1X CutSmart Buffer 組成:

・50 mM Potassium Acetate
・20 mM Tris-acetate
・10 mM Magnesium Acetate
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 50 % 
NEBuffer 2.1  : 100 %
NEBuffer 3.1  : 50 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

 

希釈バッファー:

Diluent B

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・100 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

65℃、20分間

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : 感受性なし

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

   

エンドヌクレアーゼ活性(ニッキング)
  スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。
   
エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

  1. 最適反応のためにはS-adenosylmethyonine(製品に付属)が必要である。
  2. グリセロール濃度が5%以上の場合、スター活性生じることがある。
  3. SAMの保存:SAMは32mMストック溶液として-20℃で保存する。保存溶液は0.005M Sulfuric acidと10% エタノールを用いる。本条件には最長6か月まで保存できる。SAMはpH7.5、37℃において不安定であるため、これを用いて4時間以上の酵素反応を行わないこと。仮に酵素反応が進行しない場合、新鮮なSAMを使用する。