EcoP15I
EcoP15Iカタログ番号:R0646
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格 |
保存温度 |
|---|---|---|---|---|
| R0646S | 500 units | 10,000 units/ml | ¥12,500 | -20C |
| R0646L | 2,500 units | 10,000 units/ml | 販売終了 | -20C |
製品カテゴリ>グループ
- 制限酵素>制限酵素
備考
- 備考：販売終了 ( 2019年12月 ) Sサイズは販売継続
特徴
認識配列:
| Isoschizomers
由来:
E. coli P15 (W. Arber) からクローニングされたEcoP15I遺伝子を有する大腸菌
付属試薬：
NEBuffer 3.1 (10X)
10X ATP
プロトコール
酵素特性および使用方法
ユニット定義：
1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのpUC19 DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。
反応条件：
1X NEBuffer 3.1、ATPを添加
37℃でインキュベーション。
1X NEBuffer 3.1 組成：
・100 mM NaCl
・50 mM Tris-HCl
・10 mM MgCl2
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C
各バッファー中における活性：
| NEBuffer 1.1 | ： | 75 % |
| NEBuffer 2.1 | ： | 100 % |
| NEBuffer 3.1 | ： | 100 % |
| CutSmart Buffer | ： | 100 % |
希釈バッファー：
Diluent A
保存温度：
－20℃
保存液組成：
・10 mM Tris-HCl
・100 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C
熱による不活性化：
65℃、20分間
メチル化感受性：
| dam methylation | ： | 感受性なし |
| dcm methylation | ： | 感受性なし |
| CpG Methylation | ： | 感受性なし |
品質管理
以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。
|
・ |
エンドヌクレアーゼ活性（ニッキング） |
| スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。 | |
| ・ | エキソヌクレアーゼ活性（同位体標識塩基のリリース） |
| 同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。 | |
| ・ | 非特異的DNase活性（16時間） |
| DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。 |
メモ
- DNAの切断にはATPを必要とする。
- 効率的な切断には、対向する2つの認識配列が隣接して存在することが望ましい。さらに、2つの認識配列は、CAGCAG．．．CTGCTG (トップ鎖) の向きで隣接していることが好ましい。また、切断の効率はこれら2つの認識配列間の距離によって影響される。
- dam、dcm、または哺乳類CpGメチル化による影響を受けない。
