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EcoP15I

EcoP15Iカタログ番号:R0646

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0646S 500 units 10,000 units/ml ¥12,500 -20C
R0646L 2,500 units 10,000 units/ml 販売終了 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

備考

  • 備考:販売終了 ( 2019年12月 )  Sサイズは販売継続

特徴

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認識配列:

Recognition

 | Isoschizomers

由来:
E. coli P15 (W. Arber) からクローニングされたEcoP15I遺伝子を有する大腸菌

 

付属試薬:

NEBuffer 3.1 (10X)

10X ATP

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのpUC19 DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X NEBuffer 3.1、ATPを添加

37℃でインキュベーション。

 

1X NEBuffer 3.1 組成:

・100 mM NaCl
・50 mM Tris-HCl
・10 mM MgCl2
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 75 % 
NEBuffer 2.1  : 100 %
NEBuffer 3.1  : 100 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

 

希釈バッファー:

Diluent A

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・100 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

65℃、20分間

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : 感受性なし

 

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

エンドヌクレアーゼ活性(ニッキング)
  スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。
   
エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

  1. DNAの切断にはATPを必要とする。
  2. 効率的な切断には、対向する2つの認識配列が隣接して存在することが望ましい。さらに、2つの認識配列は、CAGCAG...CTGCTG (トップ鎖) の向きで隣接していることが好ましい。また、切断の効率はこれら2つの認識配列間の距離によって影響される。
  3. dam、dcm、または哺乳類CpGメチル化による影響を受けない。