FatI
FatIカタログ番号:R0650
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格 |
保存温度 |
|---|---|---|---|---|
| R0650S | 50 units | 2,000 units/ml | ¥17,800 | -20C |
| R0650L | 250 units | 2,000 units/ml | ¥72,600 | -20C |
製品カテゴリ>グループ
- 制限酵素>制限酵素
特徴
     |
認識配列：
由来：
Flavobacterium aquatile NL3 (S.K. Degtyarev) からクローニングされたFatI遺伝子を有する大腸菌
付属試薬：
NEBuffer 2.1 (10X)
プロトコール
酵素特性および使用方法
ユニット定義：
1ユニットは、全反応容量50 μl中、55℃で1時間において、1 μgのpUC19 DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。
反応条件：
1X NEBuffer 2.1
55℃でインキュベーション。
1X NEBuffer 2.1 組成：
・50 mM NaCl
・10 mM Tris-HCl
・10 mM MgCl2
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C
各バッファー中における活性：
| NEBuffer 1.1 | ： | 10 % |
| NEBuffer 2.1 | ： | 100 % |
| NEBuffer 3.1 | ： | 50 % |
| CutSmart Buffer | ： | 50 % |
希釈バッファー：
Diluent A
保存温度：
－20℃
保存液組成：
・10 mM Tris-HCl
・50 mM NaCl
・0.1 mM EDTA
・50% Glycerol
・1 mM DTT
・200 μg/ml BSA
pH 7.4 @ 25°C
熱による不活性化：
80℃、20分間
メチル化感受性：
| dam methylation | ： | 感受性なし |
| dcm methylation | ： | 感受性なし |
| CpG Methylation | ： | 感受性なし |
品質管理
以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。
| ・ | エキソヌクレアーゼ活性（同位体標識塩基のリリース） |
| 同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。 | |
| ・ | ライゲーションおよびリカッティング |
| 制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。 | |
| ・ | 非特異的DNase活性（16時間） |
| DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。 |
メモ
１．FatIはNlaIIIのネオシゾマー（認識配列は同一であるが、切断箇所が異なる）である。
