PI-SceI
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格 |
保存温度 |
|---|---|---|---|---|
| R0696S | 250 units | 5,000 units/ml | ¥13,200 | -20C |
| R0696L | 1,250 units | 5,000 units/ml | 販売終了 | -20C |
製品カテゴリ>グループ
- 制限酵素>ホーミングエンドヌクレアーゼ
特徴
認識配列：
説明：
PI-SceIはSaccharomyces cerevisiaeのVMA ATPase遺伝子内インテインにコードされたホーミングエンドヌクレアーゼである。ホーミングエンドヌクレアーゼは2本鎖DNaseであり、その認識配列が非常に長く(12-40 bp)、パリンドローム配列でないことが特徴である。通常、イントロンまたはインテイン内にコードされている。イントロンはRNA前駆体からスプライシングされ、インテインはタンパク質前駆体から切り取られる。ホーミングエンドヌクレアーゼも制限酵素の命名法とほぼ同じ方法で命名されるが、イントロン内にコードされているものは「I-」が、インテイン内にコードされているものは「PI-」が接頭語として用いられる。
ホーミングエンドヌクレアーゼは一般的な制限酵素のように厳密な配列の認識はしない。例えば認識配列中の1塩基が異なっている場合、全く切断されないのではなく、切断効率が変化する （効率が低下することがほとんどである）。このように、切断に必要な認識配列に関してはまだ不明な点が残っているため、使用には注意が必要である。ただし各酵素の特異性に記載されている認識配列は、実際に切断されることが確認されている。
由来：
Saccharomyces cerevisiae (J. Thorner) からクローニングされたVMA1 ATPase遺伝子を有する大腸菌
付属試薬：
・NEBuffer PI-SceI (10X)
・pBSvdeX XmnI-linearized Control Plasmid (500 μg/ml)
・BSA, Molecualr Biology Grade (20 mg/ml) *2019年7月9日より変更。詳細はこちら
プロトコール
酵素特性および使用方法
ユニット定義：
1 unitは、50μlの全反応容量中でXmnIで直鎖状にされた1 μg のpBSvdeX DNAを37 ℃、3時間で切断するのに必要な酵素量として定義
反応条件：
1X NEBuffer PI-SceI、[100 μg/ml] BSA
37℃でインキュベーション。
1X NEBuffer PI-SceI 組成：
・10 mM MgCl2
・1 mM DTT
・10 mM Tris-HCl
・100 mM KCl
pH 8.6 @ 25℃
各バッファー中における活性：
| NEBuffer 1.1 | ： | 10 % |
| NEBuffer 2.1 | ： | 10 % |
| NEBuffer 3.1 | ： | 10 % |
| CutSmart Buffer | ： | 10 % |
希釈バッファー：
Diluent B
保存温度：
－20℃
保存液組成：
・10 mM Tris-HCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・500 μg/ml BSA
・50% Glycerol
・300 mM NaCl
pH 7.4 @ 25°C
熱による不活性化：
65℃、20分間
メモ
- PI-SceIはDNA切断後もDNAと結合した状態になっていることが多い。そのため反応後の溶液に終濃度0.5%となるようにSDSを加えて室温で5分間インキュベーションしてから電気泳動することを推奨する。あるいは切断産物を精製しても良い。
