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TspMI

TspMIカタログ番号:R0709

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0709S 200 units 5,000 units/ml ¥13,200 -20C
R0709L 1,000 units 5,000 units/ml 販売終了 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

特徴

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認識配列:

 

image

 

 Isoschizomers

 

由来:

Thermus species (P. Sharma)

 

付属試薬:

CutSmart Buffer (10X)

酵素特性および使用方法

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、75℃で1時間において、1 μgのpUCAdeno plasmid DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X CutSmart Buffer

75℃でインキュベーション。

 

1X CutSmart Buffer 組成:

・50 mM Potassium Acetate
・20 mM Tris-acetate
・10 mM Magnesium Acetate
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 50 % 
NEBuffer 2.1  : 75 %
NEBuffer 3.1  : 50 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

 

希釈バッファー:

Diluent B

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・20 mM Tris-HCl
・300 mM NaCl
・1 mM DTT
・1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
・0.1% Triton® X-100
pH 8.0 @ 25°C

 

熱による不活性化:

不可

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : ブロックされる

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

エンドヌクレアーゼ活性(ニッキング)
  スーパーコイル状DNAと酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、ニック導入率をアガロース電気泳動で決定。
   
エキソヌクレアーゼ活性(同位体標識塩基のリリース)
  同位体標識した1本鎖DNAと2本鎖DNA、それに酵素を含む反応中において試験を実施。4時間のインキュベーションを行い、同位体標識したヌクレオチドのリリース率を決定。
   
ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

  1. TspMIXmaIのイソシゾマーである。
  2. NEBuffer 1.1、2.1、3.1中ではスター活性を生じることがある。
  3. 各温度における活性は以下の通り:

37 ℃: 20%

65 ℃: 100%

75 ℃: 100%

80 ℃: 200%