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CviKI-1

CviKI-1カタログ番号:R0710

カタログ番号

サイズ

濃度

価格

保存温度

R0710S 250 units 5,000 units/ml ¥13,200 -20C
R0710L 1,250 units 5,000 units/ml 販売終了 -20C

製品カテゴリ>グループ

  • 制限酵素>制限酵素

備考

  • 備考:販売終了 ( 2020年4月 )  Sサイズは販売継続

特徴

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認識配列*:

Recognition

 | Isoschizomers

 

*CviKI-1は表記の認識配列を有するが、特定の条件ではRG↓CRやYG↓CYなどの配列も切断する(メモ参照)



由来:
ChlorellaウイルスであるCA-1A (J.L. Van Etten)からクローニングされ、改変されたCviKI制限酵素遺伝子を有するE. coli株。

 

付属試薬:

CutSmart Buffer (10X)

酵素特性

ユニット定義:

1ユニットは、全反応容量50 μl中、37℃で1時間において、1 μgのpBR322 DNAを消化するために必要な酵素量として定義される。

 

反応条件:

1X CutSmart Buffer

37℃でインキュベーション。

 

1X CutSmart Buffer 組成:

・50 mM Potassium Acetate
・20 mM Tris-acetate
・10 mM Magnesium Acetate
・100 μg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

 

各バッファー中における活性:

NEBuffer 1.1  : 25 % 
NEBuffer 2.1  : 100 %
NEBuffer 3.1  : 100 % 
CutSmart Buffer  : 100 %

 

希釈バッファー:

Diluent A

 

保存温度:

-20℃

 

保存液組成:

・10 mM Tris-HCl
・50 mM NaCl
・1 mM DTT
・0.1 mM EDTA
・200 μg/ml BSA
・50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C

 

熱による不活性化:

不可

 

メチル化感受性:

dam methylation  : 感受性なし
dcm methylation  : 感受性なし
CpG Methylation  : 感受性なし

品質管理

以下品質管理試験に基づいて各ロットが検証されている。

 

ライゲーションおよびリカッティング
  制限酵素でDNAを過剰消化した後、T4 DNA Ligaseで再ライゲーションする割合、それにリカットできる割合をアガロース電気泳動で決定。
   
非特異的DNase活性(16時間)
  DNA基質を含む反応中において、非特異的DNAの分解を試験。16時間のインキュベーションの後、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解が観察されないことを確認。

メモ

  1. 酵素濃度が高い、反応時間が長い、グリセロール濃度が>5%、または20% DMSOの存在下では、スター活性を生じる割合が非常に高くなる。主にRG↓CRとYG↓CYを切断する他、低い頻度でTG↓CRを切断するため、結果として小分子まで分解される。
  2. dam、dcm、または哺乳類CpGのメチル化による影響を受けない。