Hemo KlenTaq
カタログ番号 |
サイズ |
濃度 |
価格 |
保存温度 |
|---|---|---|---|---|
| M0332S | 200 reactions | ¥21,400 | -20C | |
| M0332L | 1,000 reactions | ¥85,000 | -20C |
製品カテゴリ>グループ
- ポリメラーゼ＆増幅技術>その他のPCR酵素
備考
- 備考：価格改定 (2023年4月1日)
特徴
血液サンプルから直接DNAを増幅可能なDNAポリメラーゼ
特長：
- DNA精製が不必要 - サンプルより直接PCR
- PCR反応液中の血液濃度が20%の場合もDNAを増幅
- ヘパリン、クエン酸、EDTAなどの阻害物存在下でもDNAを増幅
- 濾紙に保存されたサンプルに対応
概要：
Hemo KlenTaqは血液サンプルから直接DNAを増幅可能なDNAポリメラーゼである。Taq DNAポリメラーゼのN末端から280アミノ酸残基の欠失と全血中に存在する阻害物質への耐性変異が導入されている。ヒトおよびマウスの全血濃度が最大30%の場合でもDNA精製をすることなくPCR反応を行うことができる（50 μl反応の場合最大30%、25 μl反応の場合最大20%）。ヘパリン、クエン酸、EDTAなどの一般的な抗血液凝固剤の存在下でもDNA増幅が可能であり、また、濾紙保存乾燥血液サンプルからのDNA増幅も可能である。
Hemo Klen Taq による全血サンプルのターゲットの増幅:
Hemo Klen Taq はヘパリン、クエン酸、EDTAなどの抗血液凝固因子を含む血液サンプル、濾紙に保存された血液サンプルより高収量でターゲットを増幅することが示された。マーカーはNEB社の2-log DNA Ladder (#N3200)を使用。
由来:
N末端の2本鎖特異的5'→3'エキソヌクレアーゼドメインの欠失と3箇所の点変異が導入された変異型Taq DNAポリメラーゼ遺伝子を保有する大腸菌
付属試薬:
Hemo KlenTaq Reaction Buffer (5X)
プロトコール
Properties & Usages
Heat Inactivation:
No
Reaction & Storage Conditions
Reaction Conditions:
1X Hemo KlenTaq™ Reaction Buffer
1X Hemo KlenTaq™ Reaction Buffer:
5 mM (NH4)2SO4
3.5 mM MgCl2
6 % Glycerol
60 mM Tricine
pH 8.7 @ 25°C
Unit Definition:
Unit Assay Conditions: 1X ThermoPol Reaction Buffer, 200 μM dNTPs including [3H]-dTTP and 200 μg/ml activated Calf Thymus DNA.
Storage Conditions:
10 mM Tris-HCl
100 mM KCl
1 mM Dithiothreitol
0.1 mM EDTA
50% Glycerol
0.5% Tween-20
0.5% NP-40
Storage Temperature:
-20°C
Quality Control for Current Lot
Quality control values for a specific lot can be found on the datacard which accompanies each product.
0.5 kb Whole Blood PCR:
35 cycles of PCR amplification of 10% whole blood treated with sodium heparin, sodium EDTA, potassium EDTA or sodium citrate in a 50 μl reaction with 4 μl of Hemo KlenTaq in the presence of 200 μM dNTPS, 0.3 μM primers and 1X Hemo KlenTaq Reaction Buffer resulted in the amplification of a specific 0.5 kb PCR product.
3´→ 5´ Exonuclease Activity:
Incubation of 400 units of Hemo KlenTaq in 20 μl of a 10 nM solution of a fluorescent 5´-FAM labeled oligonucleotide for 30 minutes at 37°C and 75°C yields no detectable 3´→ 5´ degradation as determined by denaturing capillary PAGE.
Endonuclease Activity:
Incubation of 400 units of Hemo KlenTaq with 1 μg φX174 RF I DNA for 4 hours at 37°C and 75°C in a 50 μl reaction resulted in < 10% conversion to RF II as determined by agarose gel electrophoresis
References
1. Kermekchiev, M.B., Tzekov, A. and Barnes, W.M. (2003) Nucleic Acids Res, 31, 6139-6147.
Legal
Licenses/Patents/Disclaimers:
Some applications in which this product can be used may be covered by patents issued and applicable in the United States and certain other countries. Because purchase of this product does not include a license to perform any patented application, users of this product may be required to obtain a patent license depending on the particular application in which the product is used. The PCR process is subject of the European Patent Nos.201,184 and 200,262 owned by Hoffman-LaRoche. Those patents expired on March 28, 2006. The corresponding PCR patents in the United States expired on March 29, 2005.
